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多聚赖氨酸处理载玻片适用于哪些实验

可可妹妹2009 2015-02-10 20:46:19 413  浏览
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全部评论(1条)

  • 蓝霊精 2015-02-11 00:00:00
    多聚赖氨酸处理载玻片是带强阳离子的,主要用于病理组织切片、液基细胞学涂片,作用是防止玻片掉片。

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偏光显微镜适用于哪些中药

偏光显微镜在中药学领域的应用,正在为药材的研究与鉴定提供重要的科学依据。随着现代医学与中药研究的不断深入,偏光显微镜凭借其独特的光学原理和高分辨率成像优势,已成为药物鉴定和质量控制的重要工具。本文将探讨偏光显微镜在中药领域的广泛应用,具体分析其适用范围以及在中药材鉴别、质量控制和有效成分研究中的关键作用。

偏光显微镜的工作原理

偏光显微镜通过利用光的偏振特性,将光束分为不同方向的偏振光,再通过分析这些偏振光的反射和折射特性来进行观察。中药材中的一些细微结构和晶体,特别是矿物质、植物细胞的组织及其内的活性成分,能够通过偏光显微镜被清晰地显示出来。因此,偏光显微镜成为鉴别中药中微观结构及其内含物的重要工具。

偏光显微镜适用于哪些中药

  1. 矿物药材 偏光显微镜广泛应用于矿物药材的鉴别,如石膏、滑石、黄铁矿等。这些矿物药材中的结晶体在显微镜下呈现出明显的偏光现象。通过观察矿物的结晶结构及其在偏光下的表现,可以有效地区分不同的矿物药材,确保其质量与。

  2. 植物药材 对于植物药材,偏光显微镜能揭示其细胞内的结构特征。例如,植物细胞中的晶体(如草酸钙晶体)在显微镜下会显示出独特的光学性质。通过分析植物药材的晶体类型和形态,偏光显微镜可以用于区分不同品种的药材,如薄荷叶、丹参等草本植物的鉴定。

  3. 动物药材 动物药材中,某些组织如骨骼、角质和其他结晶结构也能够通过偏光显微镜进行分析。例如,动物角质中的结晶物质在偏光下呈现不同的光学表现,可帮助判断其来源及品质。

  4. 化学成分的研究 偏光显微镜还广泛用于中药有效成分的研究。许多中药成分如生物碱、黄酮类和其他天然产物,在显微镜下具有独特的光学特性。借助偏光显微镜的高分辨率观察,可以准确识别和分析这些成分,进而为中药的标准化及质量控制提供科学依据。

偏光显微镜的优势

偏光显微镜在中药研究中具有不可替代的优势。它能够通过非破坏性的方法观察药材的微观结构,不会对药材产生任何改变。偏光显微镜操作简单,图像清晰,能帮助研究人员快速而准确地进行药材的鉴定。它的高分辨率使得对于微小的晶体和结构特征的分析更加精确,尤其在中药复杂成分的研究中发挥了重要作用。

结语

偏光显微镜作为一种高效的检测工具,广泛适用于矿物、植物、动物药材的鉴定以及中药有效成分的研究。通过偏光显微镜的应用,科研人员能够更准确地识别和分析中药材的质量,为中药的现代化与标准化进程提供了强有力的技术支持。在未来,中药领域的研究与应用将更加依赖于这一技术的深入发展与创新。

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  1. 基本信息

  

  下面的应用描述了小鼠巨噬细胞系RAW-264.7(生物安全等级2)在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室载玻片的培养方案。这是一个特殊的细胞系的例子,用于显示粘附时间,细胞密度和细胞形态的示范。本应用可根据您的具体实验要求进行调整。

  

  2. 材料

  

  在设置中应用下列材料:

  

  ·RAW-264.7 (murine macrophages, CLS - Cell Lines Service, Biosafety Level 2) 

  

  ·Medium: RPMI 1640 with 2 mM L-Glutamin and 10% FBS 

  

  ·µ-Slide VI 0.4, ibiTreat (ibidi 80606)

  

  ·µ-Slide 8 well, ibiTreat (ibidi 80826)

  

  ·Accutase (PAA Laboratories GmbH) 

  

  ·1x Phosphate buffered saline (PBS) 

  

  3. 细胞培养与材料制备

  

  在将细胞接种到玻片中之前,按照常规的方法培养细胞。

  

  µ-Slide VI 0.4 :通道玻片和培养基,在37℃和5%CO2培养箱中培养过夜。这对于避免随着时间的推移出现气泡至关重要。为此,在50 ml器中填充适量的培养基,并轻轻地将瓶盖拧紧。在 µ-Slide 8孔载玻片开放孔井中,气泡可排出到大气中。

  

  拆开µ-Slide的包装,把它放在µ-Slide支架上,并在准备细胞悬浮液时同时将盖子放在 Luer 适配器/孔上。

  

  4. 播种细胞

  

  分离细胞:

  

  吸出培养瓶中的培养基,并用PBS洗涤细胞一次。每75cm² 烧瓶中加入3-5 ml的Accutase,并将烧瓶放入培养箱中以加快分离速度。如果是RAW-264.7细胞系,则大约需要8分钟。使用Accutase分离的细胞存活率更高。

  4.1. 将细胞接种到µ-Slide VI 0.4中

  

  在µ-Slide VI 0.4建议的细胞浓度:最终细胞数  0.3 x 10 5 cells/cm²,制备浓度6 x 10 5cells/ml。通过将移液器尖端直接放在通道的入口上,将30 µl细胞悬浮液填充到每个通道中。将盖子盖在玻片上,在37°C和5%CO2下孵育半小时以固定细胞。

  

  细胞贴壁后,分别用60 µl无细胞培养基填充储液池。 避免将移液器吸头直接指向通道的入口。将玻片放回培养箱中。

  图1:接种后一小时,在ibiTreat µ-Slide VI 0.4(货号80606)中的RAW-264.7

  图2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7,孵育24小时后

  图3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7,培养四天后

  

  4.2 将细胞播种在µ-Slide 8 well 中

  在µ-Slide 8 well建议的细胞浓度:最终细胞数 0.3 x 10 5 cells/cm² ,制备浓度 1.1 x 10 5 cells/ml。将300 µl 的细胞悬浮液注入各孔中。将盖子盖在玻片上,在37°C和5% CO2中孵育。不需要进一步添加培养基。

  图4:在ibiTreat µ-Slide 8 well(货号:80826)中的RAW-264.7,播种后1小时

  图5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,孵育24小时后

  图6:在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7,经过四天的培养

  

  为获得最佳的分布的匀的细胞,我们建议使用像µ-Slide VI 0.4 这样的通道载玻片。在8孔腔室载玻片中,细胞密度可能会在孔的整个表面上因点而异,具体取决于细胞播种过程中的处理。

  

  5. 免疫荧光染色

  

  像往常一样为您的细胞固定和染色。

  

  注意:在 µ-Slides 中染色时注意液体的处理

  

  µ-Slide VI 0.4 :更换液体,先吸出两个储液池而不排空通道。 如果您使用的是真空设备,请注意不要将吸头直接放在通道的入口上。 用100 µl新溶液冲洗通道3次。 从一侧添加新的溶液,通过通道流入另一个储液池,然后从另一侧吸出,直到两个储液池都排空。注意通道永远不要干涸!

  

  µ-Slide 8孔载玻片:在 µ-Slide 8孔中,无需特殊处理措施。像在任何其他培养皿或孔板中一样的交换液体。

  

  下文中,给出了使用以下材料对细胞核和肌动蛋白丝进行染色的示例:

  

  细胞核:DAPI(Diamidino pheylindol dihydrochlorid) SIGMA, 32670 

  

  肌动蛋白丝:Phalloidin, Alexa Fluor ® 488 Conjugate, LONZA, PA-3010 

  

  1. 用3.7% 的PFA在PBS(pH 7.4)中室温下固定细胞10分钟。

  

  2. 用PBS清洗细胞三次。

  

  3. 用Triton X 100(0.1%)孵育细胞5分钟。

  

  4. 用PBS清洗细胞三次。

  

  5. 用1%牛血清白蛋白在PBS中孵育20分钟。

  

  6. 用PBS清洗细胞三次。

  

  7. 在0.2μm浓度下用鬼笔环肽Alexa For 488孵育细胞20分钟。

  

  8. 用PBS清洗细胞三次。

  

  9. 用DAPI(0.5μg/ml)孵育细胞10分钟。

  

  10. 用PBS清洗细胞三次。

  

  11. 完全吸出通道并用ibidi封片剂重新填充。 现在样品可在显微镜上观察了。保存在阴暗阴凉处可储存数周。

  图7:在 µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7用DAPI(细胞核、蓝色)和Phalloidin, Alexa Fluor ® 488 Conjugate(肌动蛋白丝,绿色)

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  1.介绍

  

  本应用逐步说明了如何串联连接多个Luer-Slides。优点是仅使用一个流体单元即可观察和培养多个载玻片。当使用相同规格的载玻片时,载玻片中的流速是相同的。也可以通过连接不同高度的载玻片来改变剪切速率(例如,µ-Slide I0.2Luer和µ-Slide I0.4Luer)。

  

  本次介绍了两个载玻片连接的过程。但是它可以应用于大量的载玻片。

  

  2.材料

  

  载玻片:2片 µ-Slides I 0.6Luer, ibiTreat                ibidi (80186)

  

  细胞:Endothelial cells (2.5 · 105 per slide)          e.g. Promocell

  

  培养基:Endothelial Cell Growth Medium            e.g. Promocell

  

  连接器:Serial Connector                                      ibidi (10830)

  

  注射器:带简单Luer适配器的无菌注射器(5 ml)

  

  串行连接器:

  

  管道:Silicone Tubing 1.6 mm ID                           ibidi (10842)

  

  适配器:Luer Connector Male                                 ibidi (10824)

  

  将一个塑料连接器插入通道载玻片的两端(6厘米),以在载玻片之间连接起来。下图是在两端带有两个配套的Luer公接头的连接器管。可用乙醇或高压灭菌消毒接头。

  

  

必须在无菌条件下执行以下步骤!

  

  3. 播种细胞

  

  · 准备1.67 · 106 cells/ml.的细胞悬液。

  

  · 将150 µl注入通道。仅填充通道体积(图1a)。

  

  · 将帽盖在Luer接头上,并将载玻片放在培养箱中培养半小时来固定细胞。

  

  · 细胞固定后,将两边储液接口各加60 µl充满。

  

  4. 连接载玻片

  

  现在准备载玻片,使细胞在通道中生长,并向储液池中填充60 µl无细胞培养基(请参见第3节)。

  

  · 在连接之前,将所有储液器各加60 µl(图1b)。

  

  · 将连接器管的一个Luer适配器插入载玻片的一个母Luer适配器中(图1c)。

  

  · 将一些预备的培养基吸入注射器。倒转注射器并将多余的空气推出(图1d)。

  

  · 使用没有气泡的注射器在载玻片端口注入。可能会有些溢出(图1e)。

  

  小心地将液体注入载玻片,直到连接器管中充满为止(图1f)

  

  

  图1:(a)接种细胞时的用量; (b)载玻片在连接之前已完全填满; (c)载玻片中插入连接管; (d)无气泡的注射器; (e)将注射器插入载玻片一端; (f)用注射器推动介质来填充连接器管道

  

  · 当连接器管道完全充满时(图2a),将其插入第二张载玻片的接口上(图2b-d)。

  

  · 如果要连接两个以上的载玻片,将第二个连接器管放在第二个载玻片空的另一端口上,用注射器推入介质,依此类推。

  

  · 慢慢连接的所有载玻片将注射器从适配器上卸下(图2e)。

  

  · 要将载玻片连接到灌注套件,两个Luer容器必须在顶部填充培养基。可用纸巾擦去过多的培养基。

  

  

  图2:(a)连接管已完全充满; (b-c)将连接器管插入第二载玻片的鲁尔接头上; (d)带有适配接头管连接; (e)取下注射器; (f)擦去溢出的介质,并填充储液罐以连接到灌注套件。

  

  5. 连接到灌注装置

  

  将载玻片连接到灌注套件

  图片串联安装带有两个µ-Slides I Luer的一个流体单元

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