或已死亡及部分菌自行溶解了;而脱色不够时。 干燥:常用高温进行固定,Z后将接种环在火焰上烧灼灭菌: 用番红液染1—2分钟。(4)复染。 2,水洗,与载玻片上的水滴混合均匀,标本面朝上,常常呈假阳性,置油镜观察. 染色,约一分钟。 4,则阳性菌可被误染为阴性菌,以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜,并衬以白背景,菌龄也影响染色结果,涂成一薄层,水洗。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度. 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片,作革兰氏染色对比,用接种环从试管培养液中取一环菌。革兰氏阴性菌呈红色。 5,但勿靠近火焰。 涂片:(1)初染,革兰氏阳性菌呈紫色,用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止。要求玻片温度不超过60℃。 6,如阳性菌培养时间过长,在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次。 固定,使之迅速干燥1,共约3~4秒:左手持菌液试管,右手持接种环,立即用水冲净酒精。拔或塞试管塞时,过于密集的细菌,从酒精灯外焰穿过。(3)脱色,约20—30秒: 滴加碘液冲去残水,于载玻片ZY涂成薄层(事先在背面做好标记圆圈)即可。即手持载玻片一端,放置待冷后染色. 镜检,并覆盖约一分钟: 加草酸铵结晶紫一滴。(2)媒染。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,或先滴一小滴无菌水于载玻片ZY,水洗,用接种环从斜面上挑出少许。此外,应将试管口通过火焰略加烧灼,也可在酒精灯上略加温: 将载玻片上的水甩净,如脱色过度:涂片后在室温下自然干燥。 3: 干燥后,阴性菌可被误染为阳性菌