721系列分光光度计经搬运或长时间使用,都可能使仪器的波长产生误差。为了使仪器能正常工作,遵照国家JJG178—1996可见分光光度计检定规程,本人总结出一套完整的对于波长误差的调校方法,具体介绍如下:
一、光路调整
将仪器电源开启,把波长盘调至580nm处旋转光量调节钮,使光量较大,打开比色皿槽盖,在槽内光门侧放一白纸,此时应在白纸 上看到一长方形黄色光斑,且长方形边缘清晰,无杂色现象。否则打开仪器后盖板,松动光源灯座,移动光源灯位置,使灯丝与光源入射光长圆形孔平行,不要造成 入射光长圆形孔与灯丝成十字交叉型,以免影响通光量。让光束通过透镜射向反射镜正ZY,通过狭缝进入单色器,反复调整灯泡和灯座位置,使单色光呈现规则长 方形,直至满意为止。
二、波长误差的调校
只有在光路基本正常的条件下才能准确调校仪器波长。
1.按JJG178—1996规程,用不同波长的干涉滤光片(如420nm、550nm、650nm),对仪器进行测试。当测 试结果出现恒正误差,或恒负误差时,即在高低波长范围内的误差值恒为正,或恒为负,且三点数值基本相等,我们暂称这种现象为线性误差,此情况下调校比较容 易。打开仪器上盖板,松开波长刻度盘三个紧固螺钉,轻轻将波长盘向正或负转动误差值即可,再上好紧固螺钉,误差消除。
2.如用上述方法测试,在550nm结果准确,而在低波长段420nm处,出现正误差,在高波长段650nm处出现负误差。这 种情况称之为非线性误差,此时整个光谱谱带被压缩了,调校此种非线性波长误差方法是,松开波长盘三个螺钉,正时针方向旋动波长盘是正负误差值的 1/4nm后,旋紧波长盘三个螺钉,然后旋动波长校准螺丝,使550nm准确后,在测试420nm或650nm点处,结果正负误差减小到规程要求值,仪器 波长误差合格。
3.如用上述方法测试,在550nm处结果准确,而在低波长段420nm处出现负误差,在高波长段650nm处出现正误差。这 种现象是整个光谱带被拉伸了,调校此种非线性波长误差方法是,松开波长盘三个螺钉,反时针方向旋动波长盘,是正负波长误差值的1/4nm后,旋紧波长 盘三个螺钉,然后旋动波长校准螺丝,使550nm处结果准确后,再分别测试420nm或650nm处,结果正负误差减小到规程要求值内,仪器波长误差合 格。
4.当光路调整好后,在低、中、高波长范围内都不准确,波长误差的值也不相等,此时应首先调准确中波长段550nm处这点。其方法是可以用旋动波长校准螺丝,或是松开波长盘三个螺钉旋动波长盘,使其550nm处准确后,再测试420nm和650nm处,分析得出误差的现象,再遵循前述1、2、3点的方法调校,直至满意。
三、波长盘过紧的处理方法
通常仪器旋动波长旋钮,波长盘应较轻便地随着转动,但有些仪器因放置过久或某些原因,使波长盘很难旋动,仪器不能正常工作。此时应取下仪器 上盖板,再取下紧固波长盘的螺母,拆下波长盘,翻转仪器,打开仪器下面单色器盖板,轻轻振动或旋动波长盘主轴,取下波长盘主轴,用金相砂纸擦磨波长盘主 轴,同时清理轴承上污物,然后加上少许凡士林于主轴和轴套孔中,慢慢装上波长盘主轴和旋紧波长盘紧固螺母。在此时应特别注意:波长盘主轴下面连带的凸轮凹 槽应对准,带动棱镜机构转动的拉簧固定螺丝位置,同时波长盘应指示在580nm处,我们称之为调校波长的初始位置,再旋紧波长盘紧固螺母。此时若旋动仪器前面板波长旋钮应灵活自如,波长准确度的校正参照前述两部分方法,直至满意。
综上所述方法,总结如下几点:
1.波长调校,中点重要,即首先调校(550~580)nm中波长段准确。
2.窄向上调,即谱带变窄后,波长盘应顺时针方向旋动一定值,再调准中波长点值。
3.宽向下调,即谱带变宽后,波长盘应逆时针方向旋动一定值,再调准中波长点值。
如遵从以上方法调校仪器波长,无往而不利,其它系列仪器也可参照此法处理。
四、721型分光光度计波长的检测与校正(镨汝滤光片法)
1. 在比色槽的光路上放一张小白纸,调节波长至580nm。
2. 旋动光量T的旋钮至Z大,在小白纸上应看到桔黄色的光斑。
3. 若光斑不是橘黄色,左右旋转波长调节旋钮使之出现橘黄色的光斑,粗略判断波长偏离的程度,选择检测的起始波长。
4. 调节波长至起始波长,用蒸馏水或空气调T“0”和T“”。
5. 将镨汝滤光片推入光路中,记录T或A值,退出镨汝滤光片。
6. 调节波长至另一值,用蒸馏水或空气调T“0”和T“”。
7. 再将镨汝滤光片推入光路中,记录T或A值,退出镨汝滤光片
8. 如此反复测定直至T值为Z小或A值为Z大,记录此点的指示波长。
9. 将A值Z大时的波长减去镨汝滤光片Z大的吸收波长529nm,即得被校比色计的波长误差。
10. 如波长精度超出允许误差.(360~600nm≤3nm;600~700≤5nm;700~800≤8nm),打开分光光度计左侧调节窗口盖板,用螺丝刀试调波长的调节杆。具体位置详见仪器使用说明书。
11. 试调波长的调节杆后,再按步骤3~8操作,直至分光光度计的波长精度误差在其允许范围内即可。