全部评论(2条)
-
- zxc5200zxc 2014-12-09 00:00:00
- 做任何实验都是需要对照的,内参就是一个阳性对照,如果连阳性对照都没有扩出来,说明模版是有问题的,那么你的目的基因肯定是扩不出来的。常用的管家基因就三种:GAPDH、ACTIN、18S RNA。
-
赞(19)
回复(0)
-
- 深夜孤灯1 2018-04-01 13:56:46
- 你说的应该是real time PCR吧,注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写,和real time一定要分开来。 常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时(real time)的方法,测定样品中某个模版的起始量ct值 但是呢,由于之前RNA提取、反转等步骤,各个步骤存在不同的效率,ct值并无法真实反应样品中模版的量,因此,需要一个内参来做为参考。 比方说,A基因的ct值,在a样品中是18,在b样品中是20,由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同,你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。 这时候,我们需要一个内参,假如内参ct值在a样品中是14,而在b样品中是15。由于内参的稳定性,在不同样品中被认为是表达量一致的,因此,A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1,也就是表达量为2倍的关系。 这里,我们可以知道内参的作用,即通过测量内参,可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因,这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例,常用的内参有actin gapdh hprt等等。 当然,现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同,例如gapdh,在线粒体含量高的组织中丰度高,很多人认为用基因组DNA做内参会更加靠谱,当然这是后话了,选择gapdh无碍于现阶段的实验,如果觉得不靠谱,可以选择两个内参。 你所研究的物种,应该有人已经发表过相应的内参,直接上数据库搜就可以了。 原创内容,码字不易,万望采纳。
-
赞(7)
回复(0)
热门问答
- 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
2018-11-19 02:16:13
523
0
- 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
2015-11-29 20:44:19
646
1
- 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
2014-12-08 07:26:32
784
2
- 做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系?
- 还有就就是,为什么要制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板? 这些步骤在实验中有什么作用?
2012-05-31 00:50:59
619
2
- 如何选择并调整内参基因
2016-05-03 01:16:30
417
1
- rt-pcr结果分析时要内参校正吗
2018-11-19 11:37:46
204
0
- rt-pcr 目的和内参基因的扩增效率都是1.82可以吗
2017-01-10 13:45:17
416
1
- P38的免疫印迹内参怎么选择
2017-02-16 07:33:24
457
1
- 温度计应该如何选择
2017-09-23 03:31:51
422
1
- RT-PCR的注意事项是什么?
2013-04-19 02:46:44
313
1
- rt-pcr目的基因和内参基因不在同一块板上可以吗
2017-03-18 15:35:33
963
1
- 有做RT-PCR不用试剂盒的吗
2017-03-06 20:13:41
499
1
- 如何选择软件开发公司做合作?应该注意什么?有没有推荐?
2016-12-12 00:58:55
250
1
- opc级别引物做rt-pcr怎么样
2016-09-27 22:12:58
478
1
- 应该如何选择室内空气质量检测仪?
- 想了解一下,选择空气质量检测仪有哪些基本参数设置?
2017-07-12 00:37:28
511
1
- 购买超声波清洗机,应该如何选择?
2011-12-04 10:54:43
512
3
- 如何提高RT-PCR反应体系的灵敏度
2016-04-12 18:40:43
309
1
- 荧光光谱分析中应该如何选择滤光片
2012-04-17 03:37:47
337
2
参与评论
登录后参与评论