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PCR纯化产物为什么能直接连接,什么情况下直接连接?求高手指教。

ma492179069 2011-09-19 08:54:52 639  浏览
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参与评论

全部评论(4条)

  • 泪伊冰 2011-09-20 00:00:00
    楼主莫不是问TA克隆,常规的Taq酶,会在产物的3‘端额外加一个A,这时就可以利用这个A,直接连接到T载体上。所谓T载体,一般是将载体以EcoRV酶切,然后在末端加一个T,与PCR产物上的A互补配对,经连接酶连接就可以用于转化了。

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  • bkfzuyqv2876 2011-09-20 00:00:00
    PCR利用了DNA的热变性原理,在温度上升到90&(代表摄氏度符号)以上时,双链DNA解聚为单链;温度下降到50&左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;温度上升到72&左右,溶液中的四中脱氧核苷酸(A.T.C.G)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。你所提到的什么情况下直接连接,是在有引物何聚合酶的情况下。

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  • 顾天虹123 2011-09-20 00:00:00
    PCR扩增产物两端都有酶切位点的情况下,由于互补配对就可以直接连接。

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  • xinxmv0119 2011-09-21 00:00:00
    PCR纯化产物直接连接通常分为两种情况, 一是TA连接,如phusion,高保真的taq,PCR后会有一个A末端,和T载体的T末端互补相连。 另一是平末端连接,如pfu,PCR后是平末端,可以和blunt II vector这一类的载体直接相连,但顺序是随机的,可能是正的,也可能是反的。

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