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上海联迈 Bid蛋白;BH3相互作用域死亡激动剂(Bid)重组蛋白

上海科学仪器有限公司

企业性质

入驻年限第9年

营业执照
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BID蛋白;BH3相互作用域死亡激动剂(BID)重组蛋白

英文名称:Recombinant BH3 Interacting Domain Death Agonist (Bid)

p22 BID

来源:原核表达

宿主:E.coli

规格:10μg   50μg   200μg   1mg   5mg

内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书

片段与标签:Met1~Asp195 (Accession # P55957) with N-terminal His Tag

物种来源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种)相同的名称,不同的物种

性状:冻干粉

表达系统:    大肠杆菌

产品纯度:>95%

保存条件:如果样品在2-4周内使用,可以在4°C低温储存。 

长期储存,建议添加载体蛋白(0.1%HSA或BSA),并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。

BID蛋白;BH3相互作用域死亡激动剂(BID)重组蛋白表达纯化:

联迈生物致力于为客户提供高纯度,低成本的活性重组蛋白,包括各类受体,细胞因子,生长因子,转录因子,激素、酶、蛋白、病毒抗原等,满足客户下游科研实验研究的需要。联迈生物拥有先进的蛋白表达技术及丰富的蛋白表达经验,完成了多种正常条件下不表达、难表达、表达量低的蛋白的制备。

BID蛋白;BH3相互作用域死亡激动剂(BID)重组蛋白表达出来的蛋白比实际大小要小,这是为什么?

主要原因有如下几个方面

1.     蛋白本身被降解了,可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶

2.     翻译起始位点的问题:如果一个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游,降解就会有可能出现。解决的方法可以采用两端都带有融合标签的载体,例如pET系列部分载体在N-端和C-端都有His-Tag融合标签。这样,全长蛋白就可以通过提高咪唑浓度,在洗脱时将截短蛋白与全长蛋白区分开。或者在蛋白两端采用不同标签,进而通过亲和纯化的方式得到全长蛋白。

3.     影响蛋白稳定性的另外一个因素是与N端Met相邻的氨基酸,即N端原则,当下列氨基酸出现在N端时: Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期较短,蛋白会存在不稳定降解的问题,特别是Leu,当它出现在第二个位置上时,蛋白极度不稳定。在选择克隆位点时, Nco I 和Nde I都是 是一个比较好的N端的克隆位点选择,而使用NdeI的时候就要特别留意Leu的出现。

BID蛋白;BH3相互作用域死亡激动剂(BID)重组蛋白如何提高蛋白的可溶性表达比例及表达量?

有些蛋白质表达水平低,或者表达的大多是包涵体,通常情况下通过基因优化,载体及菌株的筛选,表达条件优化,诱导条件优化等可以有效增加蛋白的可溶性比率及表达量。

1.     密码子优化

密码子优化是根据大肠对密码子的偏好性进行优化筛选,一般选择使用频率大于20%的密码子。经过优化的基因序列能提高mRNA二级结构的稳定性,避免因为不充足的tRNA库导致翻译延迟,成熟前翻译终止,翻译移码和氨基酸错配。

2.     降低蛋白表达速率

通过降低IPTG的诱导浓度,降低蛋白的表达速率。通过调节促使肽链聚集的速率与其折叠速率平衡,有利于提高蛋白的可溶性表达。

3.     温度

37度的表达条件往往会使一些蛋白形成包涵体,而30度的表达条件则可能产生可溶的或者有活性的蛋白。在某些条件下(12-20度)延长诱导时间(过夜)会使溶解性蛋白的产量达到大。

4.     细胞周质表达

我们可以选用一些将蛋白运输到细胞周质的载体。周质空间更有利于蛋白的正确折叠及二硫键的形成。常规选用的载体有pet22系列。但是我们要注意的是,有些蛋白并不适合于被运输到周质空间,比如一些与β-gal融合的周质的内部被证明是有毒的。