GST融合蛋白纯化

GST融合蛋白纯化

      卡梅德生物拥有多年重组抗体制备，重组蛋白表达服务经历，根据不同类型蛋白纯化技术具有专业技术水平和丰富经验积累，我们坚持为客户提供高品质的相关服务，包括从信息咨询到详细实验方案的设计与实施等一体化服务，能够针对性的满足不同客户的需求。

重组蛋白纯化服务 — GST融合蛋白纯化

GST (Glutathione S-transferase)，中文名称为谷胱甘肽巯基转移酶，能够催化GSH（谷胱甘肽）形成GS-GST的复合物。纯化系统是利用GST（glutathione-S-transferase）融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过二硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。GST全长211个氨基酸，分子量为26kDa，具有高度的亲水性，因此也常被用于改善目的蛋白的可溶性。

---GST融合蛋白纯化步骤：

①从LB平板上挑取单克隆接种到2ml LB液中(Amp+)，220-250rpm，37℃振荡培养至OD600值约为0.6；

②按照1：100的比例将活化后菌体接种到TB培养基中，测定起始OD600值，37℃振荡培养，当OD600值增加0.6-1.0单位时（通常3-6小时），加入IPTG至终浓度10μM继续摇床培养3～4h

③4000 rpm离心10min收集菌体

④5-10倍柱体积的lysis buffer重悬细菌，加入PMSF等蛋白酶YZ剂，超声400-600瓦破碎细胞

⑤4℃，8000rpm, 离心20min取上清过谷胱甘肽琼脂糖柱

⑥过柱前后，均用5×柱体积的lysis buffer洗层析柱，收集流穿液

⑦Elution buffer洗脱,收集洗脱峰前，峰中间和峰后，SDS-PAGE鉴定纯度

⑧GST标签移除：凝血酶等酶切后，非变性胶分离纯化。

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