Advance人多能干细胞培养基（上海埃泽思AC-1001001）

Advance人多能干细胞培养基

产品基本信息

产品简介

Advance人多能干细胞培养基是埃泽思生物科技有限公司（Applied CellTM）自主研发的一款营养成分更丰富，适用于大多数多能细胞系培养，且适用于iPS建系。该培养基适用于Essential 8系统和mTeSR培养系统，为无滋养层培养、无血清、化学成分明确。可应用于干细胞传代，内含干细胞保护因子，防止细胞的凋亡、分化，对细胞具有良好的保护作用。GMP级别生产车间，严格执行cGMP操作标准，各项指标优于行业标准。

产品特性

l 适用于E8系统和mTeSR系统培养的人多能干细胞

l 成分明确，批间差小

l 无需滋养层细胞

l 营养更丰富，适用于大多数细胞系培养，且适用重编程过程细胞培养

产品内容

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实验准备 Advance人多能干细胞培养基配制

1）2-8℃解冻Advance hPSC Medium Supplement，融化后上下晃动混匀，按实际用量进行分装，立即使用或储存于-20~ -80℃，避免反复冻融；

2）按1:4的比例将Advance hPSC Medium Supplement（10mL）加入到Advance hPSC Medium Basal Medium(500mL)中，混合均匀即成为人多能干细胞培养基。混匀后的人多能干细胞培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用配制已超过3周的人多能干细胞条件培养基。

3）实验试剂平衡：人多能干细胞培养基实验前放置室温避光平衡；PBS，消化液等37℃加热。

注意：培养基中含有因子，不要37℃水浴加热。

操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)

hPSC细胞复苏

1. 实验操作步骤：

1.1  基质胶包被培养板：取出6孔板/12孔板，每孔内加入1 mL/0.5 mL即用型基质胶（AC-1001007），轻轻晃动6孔板/12孔板使基质胶完全覆盖皿底，置于37℃培养箱中孵育1h~2h，实验前拿出并置于超净工作台/生物安全柜中室温下平衡20min。如果暂时不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 储存，并于1周内使用。

注意：①一支冻存的干细胞的数量在1×106cells/mL左右，对应6孔板1孔；②即用型基质胶对温度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接触碰基质胶液面所及的瓶身，影响基质胶质量。

1.2  先将2~3mL的干细胞培养基加入15mL离心管中备用。

1.3  解冻：将从液氮中取出的冻存管快速浸入37℃温水中，快速摇动，使其在1~2min内快速解冻；

注意：细胞从液氮中拿出的速度要快，尽量减少其暴露在室温中的时间。

1.4  离心：冻存管中的冻存液解冻后，将其逐滴加入含有干细胞培养基的15mL离心管中，将15mL离心管置于低速离心机中配比平衡后，1000rpm离心3min；

1.5  重悬：离心后弃上清加1mL Advance人多能干细胞培养基对干细胞沉淀进行吹吸混匀，吹吸3~5次左右。

1.6  接种：吹吸均匀后，将已经平衡好的即用型基质胶弃掉，将吹打均匀的干细胞悬液加入到已经包被好的6孔板中，并补全每孔2mL培养体系。

1.7  培养：接种后的6孔板可以置于倒置相差显微镜下观察接种的干细胞密度以及细胞团块大小，呈4个细胞以上的团块较合格，水平十字轻轻晃动6孔板/12孔板使细胞均匀分布。并置于37℃，5% CO2的恒温培养箱培养，第2天观察细胞贴壁情况；

1.8  换液：从复苏的时间开始每24h换液一次。

注意：因培养基中活性成分只足够维持一天，所以每24h应及时更换新鲜培养基。

质量控制