北京索莱宝 杀稻瘟菌素 S（Blasticidin S) B9300-10mg

Blasticidin S是一种来自Streptomyces griseochromogenes的核苷类抗生素，通过干扰核糖体中肽键的形成来特异性地YZ原核和真核生物的蛋白质合成。Blasticidin S用于筛选携带有bsr或BSD耐受基因的转染细胞。杀稻瘟菌素具有快速而的作用模式，很低的抗生素浓度便能导致细胞迅速死亡。

抗性基因：

目前已经克隆和测序的杀稻瘟菌素耐受基因有3种，一种是分离自产生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基转移酶基因bls，另外两种是脱氨酶基因，包括从Bacillus cereus 中分离的bsr和从Aspergillus terreus 中分离的BSD 基因。Bsr和 BSD基因是最常用的筛选标志，用于哺乳动物和植物细胞的基因转移实验，也可用于E.Coli。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存，有效期至少1年，避免反复冻融。

应用浓度：

1）Escherichia coli

E. coli对Blasticidin S的敏感性稍差，但是转化子对Blasticidin S具有耐受性，可以用低盐LB培养基（pH 8）进行筛选，浓度范围为50-100 μg/ml Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。

2）哺乳动物细胞

哺乳动物细胞中Blasticidin S的工作浓度范围在1-50 μg/ml。初次实验建议通过灭杀曲线来确定**使用浓度。

操作步骤（哺乳动物稳转株筛选）：

Blasticidin S通常使用浓度为10 μg/ml。携带bsr或BSD基因的质粒转染到细胞中，在含有Blasticidin S的正常生长培养基中孵育，用于筛选稳定转染细胞株。

（1）转染后48h，用含有适宜浓度Blasticidin S的新鲜培养基将细胞传代（注：细胞处于活跃分裂期时抗生素工作**。细胞密度太高，抗生素效率降低。细胞分盘时覆盖率**不超过25%）；

（2）每3-4天去除培养基，加入含抗生素的新鲜培养基；

（3）7天后检测细胞集落形成。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率，集落形成可能需要增加一周或更久。

（4）转移5-10个耐受克隆到35mm细胞盘中，加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。