德国 PicoQuant MicroTime 200 STED 超分辨时间分辨共聚焦荧光显微系统

超分辨时间分辨共聚焦荧光显微系统

MicroTime 200 STED

• 基于倒置显微镜的完整共聚焦STED系统

• 光学分辨率低于50nm

• 640nm激发，595nm和660nm附加可选

• 支持门控STED（gSTED）和gSTED-FCS

• 压电平移台，用于2D，3D寿命成像和精确定位

• 匹配有高级版易用型数据采集、分析和可视化软件SPT64

• AFM/FLIM/STED联用的独特升级

• 支持MicroTime 200可用的所有其他手段，即FLIM、FCS、FCCS、FLCS、FRET等

• FLIMbee 振镜扫描附件，具有出色的扫描速度灵活性和优秀的空间精度
  

• 可以通过使用FLIMbee振镜在X轴上进行线扫描来实现scanning FCS测量

产品简介

        近年来，超分辨率显微镜得到了越来越多的关注。现在它已经超越了研发阶段，并应用于研究以前被光的衍射极限所掩盖的生物学样品。超分辨率成像最普及的技术之一是受激发射损耗（STED）显微镜。STED通常用共焦显微镜为主体，因此非常适合添加到MicroTime 200中。将STED集成到系统中，一直朝着最高的稳定性和易用性发展。该系统能够无需冗长的准备工作就可以运行STED显微镜，同时仍然可以选择使用MicroTime 200的全部功能。

小于50nm的光学分辨率

        STED显微镜利用受激发射损耗的原理。在激发激光焦点中的荧光团后，用第二个波长更长的、甜甜圈状的激光来通过主动损耗被激发的分子外围。在MicroTime 200 STED中，甜甜圈的光斑是用EASYDOnut相偏板完成的。在光路中，它将STED激光焦点改变为甜甜圈形状，而激发光不受影响。这种简单的实现方式免去了来自同一根光纤的两个激光束的对准工作，并且实现了空间分辨率小于50 nm。由于MicroTime 200 STED的时间分辨数据采集原理，还可以将时间门控应用于所有测量数据。这种门控STED（gSTED）方法可进一步提高图像分辨率，并减少FCS的观测时间。

激发波长可选

         MicroTime 200 STED配有激光耦合单元，该单元将激发光与STED损耗光集成在一起。标准的激发波长是640nm，可选与595nm和660nm激光组合，用于双组分扫描成像。由于STED损耗光在765 nm处具有很高的功率，因此在操作仪器时要特别注意以确保使用者安全。MicoTime200的标准激光耦合单元也可以连接到系统上，用于非STED应用，如FLIM、FRET或FCS。

        激光功率和重复频率可以通过多通道激光驱动器PDL 828“ Sepia II”进行灵活调整，该驱动器可以并行驱动多个激光器，从而实现脉冲交替激发（PIE）等高级功能。激发脉冲和STED脉冲之间的时间延迟也是可调的，以实现最高的灵活性和最佳的STED分辨率。

扫描技术

        MicroTime 200平台的强大的多功能性得到了FLIMbee振镜的补充，它可以提供从非常慢到快的扫描速度，同时保持较高的精度。高灵活速度的扫描可以用于rapidFLIM技术，来实现从磷光寿命成像（PLIM）到快速荧光寿命测量的应用。此外，由于其高精度和高灵敏度，FLIMbee振镜适用于STED进行超分辨显微成像，从而使成像分辨率提升至单分子水平。

         配备了FLIMbee振镜的MicroTime200是单光子检测（SMD）的理想选择，如：spFRET、PIE-FRET、(STED-)FCS、FLCS,、FLCCS、双聚焦FCS (2fFCS)，甚至各向异性的测试。此外，还可以进行共聚焦和NDD检测的双光子激发（TPE）。

        FLIMbee振镜的核心是由三个高精度转向镜组成，它们具有出色的线性度、重复性和低漂移。两个Y轴振镜保证激光光束固定在物镜入口。这个镜子结构最大程度减小了像场的渐晕，确保在较宽的扫描范围内保持恒定的聚焦体积。使用100x物镜时，FLIMbee振镜可提供低至10nm的最小像素尺寸。

单光子灵敏度的探测子系统

        在MicroTime 200 STED中，可通过压电平台方便地进行扫描，可选高精度PiFoc压电Z轴实现3D成像。压电扫描可确保较高的重复定位精度和稳定性，这对于高质量STED图像至关重要。系统最多可配置六个并行检测通道。对于使用在765 nm损耗光的STED染料，通常使用SPAD，因为SPAD在该光谱范围内具有高达70％的高检测效率。

皮秒分辨率的门控STED

        TCSPC模块采用皮秒分辨率的时间标记的时间分辨（TTTR）数据采集模式。所获取的TTTR数据不仅可以用于常规STED成像，还可以执行门控STED（gSTED）测量。TTTR数据采集模式的优势在于，它仅基于一种基本数据格式，就可以实现包含STED和其它多种功能，例如FLIM、FCS甚至符合相关（“反聚束”）等应用。 PicoQuant的所有可用TCSPC模块都支持TTTR格式。

直观的数据采集和分析

        SymPhoTime 64，是MicroTime 200 STED的系统软件, 具有专用于STED数据采集和分析功能。比如，预设的时间门控已集成在测试预览功能中，并且可以在数据分析过程中，为更高STED分辨设置更加灵活的时间门控。独特的荧光“模式匹配”功能可以用于从同样STED激光波长记录的数据中分离多种物质。

FLIM、FRET、FCS等

         MicroTime 200 STED不仅具有STED和STED-FCS功能，而且还支持MicroTime 200可用的所有其他测量和分析程序。这包括FLIM，FCS，FCCS，FLCS，FRET，PIE-FRET或强度时间轨迹等等。