大鼠心钠素(ANP)ELISA试剂盒说明书

大鼠心钠素（ANP）ELISA试剂盒说明
该试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名称：大鼠ANP（ANP）酶联免疫测定试剂盒
用途：
该试剂盒用于测定大鼠血清，血浆或相关组织液的含量利钠肽（ANP）。
实验原理
该试剂盒采用双抗体夹心法测定标本中大鼠心钠素的水平。用纯化的大鼠心房利钠肽（ANP）抗体包被微量滴定板，制成固相抗体，将大鼠心房利钠肽（ANP）加入包被的单克隆抗体的微孔中，然后与HRP标记的心房利钠肽（ ANP）抗体结合形成抗体-抗原-酶标记的抗体复合物。彻底洗涤后，添加底物TMB以显色。 TMB在HRP酶的催化下转化为蓝色，在酸的作用下转化为ZZ的黄色。颜色的强度与样品中的心钠素（ANP）正相关。用酶标仪在450nm波长处测量吸光度（OD值），并根据标准曲线计算样品中大鼠心钠素的含量。
试剂盒组成

1 20倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（540ng / L）0.5 ml ×1瓶
3酶标涂层板12孔×8条9标准稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10使用说明1复制
5彩色显影剂溶液6ml×1瓶11密封膜2张
6彩色显影剂B溶液6ml×1 /瓶12 1密封袋

样品处理和要求
1。血清和血浆样品可以直接测定；
2。无法检测到包含NaN3的样品，因为NaN3YZ了辣根过氧化物酶（HRP）的活性。
3。收集后尽快进行实验。如果不能立即进行测试，则可以将样品保存在-20°C下，但应避免反复冷冻和解冻。
操作步骤
1。标准品的稀释和样品添加：在酶标涂板上依次设置10孔标准品，分别在**和第二孔中分别添加100μl标准品和**。在第二个孔中加入50μl标准稀释剂并混合均匀；然后分别向第三和第四孔中添加100μl，然后向第三和第四孔中添加50μl标准稀释液并混合，然后，从第三和第四孔中取出50μl并丢弃；然后各取50μl，分别加到第五和第六孔中；然后在第五和第六孔中加入50ul标准稀释剂，并混合均匀；混合后，从第五和第六孔中取50μl，分别加到第七和第八孔中。然后在第七和第八孔中加入50μl标准稀释液，并从第七和第八孔中混合它们。从第八孔中取50μl，加到第九和第十孔中；然后在第9和第10孔中加入50μl标准稀释液。混合后，从第九和第十个孔中取50μl并丢弃。 （稀释后，每个孔的体积为50μl，浓度为360ng / L，240ng / L，120ng / L，60ng / L，30ng / L）。
2。添加样品：设置空白孔（空白对照孔不添加样品和酶标试剂，其余步骤相同）并测试样品孔。将40μl样品稀释液添加到ELISA包被板上的测试样品孔中，然后添加10μl的测试样品（样品*ZZ稀释度为5倍）。添加样品：将样品很好地添加到微量滴定板的底部，然后轻轻摇晃以混合。
3。孵育：用密封膜密封平板，然后在37°C下孵育30分钟。
4。液体制备：用蒸馏水将20倍浓缩的洗涤液稀释20倍，然后用于以后使用5。清洗：小心地取下密封膜，丢弃液体，旋转干燥，在每个孔中装满清洗液，然后静置。放置30秒钟并丢弃，重复5次，然后拍干。
6。添加酶：除空白孔外，向每个孔中添加50μl酶标试剂。
7。孵化：操作与3相同。
8。洗涤：操作与5相同。
9。显色：向每个孔中加入50μl生色试剂A和50μl生色试剂B，轻轻摇动，并在黑暗中于37°C显色15分钟。<10>。停止：为每个孔添加50μl溶液停止，停止反应（此时，蓝色变为黄色）。
11。测量：用空白的空调器零波长和450nm波长依次测量每个孔的吸光度（OD值）。添加终止溶液后，应在15分钟内进行测量。

计算
以标准物质的浓度为横坐标，以OD值为纵坐标，在方格纸上画出标准曲线，并根据OD从标准曲线中找到相应的浓度。样品的价值；然后将稀释系数与标准曲线的线性回归方程相乘；或使用标准品的浓度和OD值计算标准品曲线的线性回归方程。将样品的OD值代入方程式以计算样品浓度，然后将其乘以稀释倍数即可得出样品的实际浓度。
注意事项
1。从冷藏环境中取出后，应在室温下平衡套件15-30分钟后再使用。如果开封后未用完酶标的涂层板，则应将板保存在密封袋中。
2。浓缩的洗涤液可能会结晶出来。稀释后，可在水浴中加热以帮助溶解，并且在洗涤过程中不会影响结果。
3。在添加样品的每个步骤中都应使用采样器，并应经常检查其准确性，以避免测试错误。一次添加样品的时间应控制在5分钟以内。如果样品数量很多，建议使用行枪添加样品。
4。请在每次测量的同时制作标准曲线，制作一个重复的孔。如果样品中待测物质的含量太高（样品的OD值大于标准孔**孔的OD值），请用样品稀释剂稀释一定倍数（n次）在测量之前。计算时，请*乘以总稀释因子（×n×5）。
5。严格按照手册中的说明进行操作，并且必须根据酶标仪的读数确定测试结果。
6。不得混合该试剂不同批次的成分。
7。密封膜只能一次性使用，以避免交叉污染。
8。所有样品，洗涤液和各种废物均应视为传染病。
9。请保持基材远离光线。
检测范围：
20ng / L -400ng / L
规格：
96份/盒
储存条件和有效期
1。试剂盒保存：2-8℃。
2。有效期：6个月