色谱保留时间漂移的故障排除1

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保留时间不再出现。有两种不同的情况：保留时间漂移和保留时间波动。前者表示保留时间仅在一个方向上发生变化，而后者表示保留时间的波动没有固定的定律。区分这两种情况以找出问题原因通常是有帮助的。例如，保留时间的漂移通常是由色谱柱老化引起的；色谱柱老化不太可能引起保留时间的不规则波动。实际上，造成保留时间漂移的大多数原因是由于不同的机理而导致的色谱柱老化，例如固定相的损失（例如通过水解），色谱柱的污染（由于样品或流动相）等等。保留时间漂移的几种常见原因如下：-色谱柱平衡
如果观察到保留时间漂移，则应首先考虑色谱柱是否已完全被流动相平衡。通常，平衡需要10-20倍柱体积的流动相，但是如果将少量添加剂（例如离子对试剂）添加到流动相中，平衡柱将需要很长时间。
流动相污染也可能是原因之一。少量溶解在流动相中的污染物可能会缓慢聚集在色谱柱上，从而导致保留时间漂移。应当指出，水是一种易被污染的流动相成分。
第二固定相的稳定性
固定相的稳定性受到限制。即使在建议的pH范围内使用，固定相也会缓慢水解。例如，硅胶基质在pH 4时具有良好的水解稳定性。水解速率与流动相和配体的类型有关。在键合相中，双官能配体和三官能配体比单官能配体更稳定。长链键合比短链键合更稳定；烷基键合比氰基键合稳定得多。
经常清洗色谱柱也会加速色谱柱固定相的水解。其他基于二氧化硅的键合相也可以在水性环境中进行水解，例如氨基键合。
三色谱柱污染
保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。 HPLC色谱柱是一种非常有效的吸附过滤器，它可以过滤和吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管，泵，进样器和仪器垫片以及样品。污染源通常可以通过实验确定。
如果样品中的色谱柱上保留有强烈保留的组分，则可能是保留时间漂移的潜在来源。这些根本原因通常是样本矩阵。例如：药物制剂中的赋形剂，生化样品（例如血清）中的蛋白质和脂质化合物，食品样品中的淀粉，环境水样品中的腐殖酸等。通常，样品中保留的强组分具有较高的分子量。在这种情况下，背压会在保留时间漂移的同时或之后增加。可以通过使用样品制备方法（例如固相萃取（SPE））消除样品基质的影响。
避免色谱柱污染*简单的方法是在问题发生之前就进行预防。相反，找到问题的根源并设计有效的清洁步骤以去除污染物要困难得多。通常在给定的色谱条件下使用强溶剂，但并非所有污染物都可以溶解在流动相中。例如，THF可以在反相色谱柱中去除许多污染物，但是蛋白质无法溶解在THF中。 DMSO通常用于从反相色谱柱中去除蛋白质。
使用保护柱是一种非常有效的方法。反吹色谱柱只是ZH的选择。
四种流动相的组成
流动相组成的缓慢变化也是造成保留时间漂移的常见原因。例如，流动相中挥发性成分的挥发和循环是相等的。
五个疏水性塌陷
当具有小孔径且端基密封良好的反相填充色谱柱使用接近100％的水作为流动相时，有时会发生突然的分离损失并保留分析物明显减少或根本不减少。保留现象，这是疏水性塌陷。这种现象是由于流动相没有渗透到固定相的表面而引起的。救援方法是用含有大量有机成分的流动相渗透固定相，然后使用高含水量的水。
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