人类N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）ELISA试剂盒说明
人类N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）ELISA试剂盒仅供研究
< div>检测范围：0.533 mIU / ml-40 mIU / ml
*低检测限：0.03 mIU / ml
预期应用：ELISA方法定量测定人血清中NAG的含量，血浆和其他相关生物流体。
说明：
1。新打开的ELISA板孔中可能有少量水样。这是正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
2。浓缩的洗涤液在低温存放时会沉淀出盐。稀释后，可在水浴中加热以帮助溶解。
实验原理：使用竞争性酶联免疫吸附法检测NAG含量。首先用单抗体包被微量滴定板以制备固相抗体，然后添加测试样品或标准品以及辣根过氧化物酶标记的NAG以形成包被的抗体-NAG（HRP）复合物。显色后，在酶标仪中测量吸光度值（OD值），并通过计算机或图形拟合浓度-吸光度曲线，并重新计算出待测样品中的NAG含量。
人类N-乙酰基-β-D-葡糖胺酶（NAG）ELISA试剂盒的组成和试剂制备：
1。测定板：一件（96孔）。
2。标准：5×0.5 ml /瓶。
标准液S1 S2 S3 S 4 S 5
浓度（mIU / ml）0.533 1.067 2.67 10.67 40
3。酶结合物（HRP-结合物）：1×6ml /瓶。
4。底物A：1×7ml /瓶。
5。底物B：1×7ml /瓶。
6。洗涤缓冲液：1×15ml /瓶，每瓶在使用时用蒸馏水稀释20倍。
7。停止溶液：1×7ml /瓶
需要的试剂和设备，但未提供：
1。标准规格酶标仪器
2。高速离心机
3。电加热恒温培养箱
4。清洁试管和Eppendof管
5。一系列可调节的移液器和吸头，多通道移液器是一次测试大量样品的ZJ选择
6个蒸馏水，容量瓶等。
样品收集和存储：
1。血浆：EDTA或肝素可用作抗凝剂。收集后30分钟内，将样品在2-8°C下以1000 xg离心15分钟，或将样品置于-20°C或-80°C下保存。但要避免反复冻融。
2。血清：请将全血样品在室温下放置2小时，或在4°C下放置过夜，然后以1000 xg离心20分钟。取上清液进行测试，或将样品置于-20°C或-80°C下保存，但避免反复冷冻和融化。
注意：以上标本应在4℃下保存少于1周，应密封和保存-20℃或-80℃，-20℃不能超过1个月，-80℃不超过2个月； *之后，样品的溶血会影响测试结果，因此该测试不适用于溶血的样品。
操作步骤：
1。将各种试剂在室温[18-25℃]下平衡半小时，取出浓缩的洗涤溶液，然后使用蒸馏水1：在20稀释，混合均匀并静置。
2。取出ELISA板，在不加任何液体的情况下设置空白对照孔；依次为每个标准点设置两个孔，向每个孔中添加50ul相应的标准液；直接添加50ul待测样品。
3。向每个孔（空白对照孔除外）中加入50ul酶结合物，混合均匀，在盖上贴上标签，并在37°C下孵育1小时。
4。手动清洗板并丢弃孔中的液体。用洗涤液填充孔中，静置10秒钟以旋转干燥，重复3次，然后拍干。用洗板机清洗印版，选择三个清洗程序，清洗印版并拍干。
5。向每个孔中添加50μl显影剂A溶液和50μl显影剂B溶液。摇动和混合后，在黑暗中于37°C显色15分钟，然后向每个孔中加入50μl终止液。
6。用酶标仪读取，波长为450nm，首先用空白孔调节零点，然后测量每个孔的OD值。
数据处理：
1。计算机：使用线性拟合功能，将标准S1-S5的浓度作为对数（Log（浓度））作为X，并减去空白对照孔的OD值后，将对数（Log（将OD值-NSB））作为Y以执行线性拟合。然后从拟合线计算要测试的血清浓度。
2。手动工作图：使用双对数方格纸，以标准品的浓度为水平轴，对应的0D值为垂直轴，绘制平滑曲线或直线，并沿被测曲线查找对应的浓度值为血清OD值。
注意事项：
1。试剂盒中的所有瓶装试剂和从冷藏环境中取出的所需预涂板条均应置于室温（18-25℃）以平衡30。只能在几分钟后使用，其余应密封在时间，并保存在2-8°C并避光保存以备后用。
2。使用前应将试剂充分摇匀。
3。结果判断必须在反应终止后10分钟内完成。
4。不能混合不同批号的试剂。
5。添加样品时，应注意避免试剂和所用样品之间的交叉污染。
6。在操作过程中，试剂盒中的每种试剂应使用一个吸头，每种标准品应使用一个吸头，每个样品均使用一个吸头。JD最适合一次性使用。
特异性：该试剂盒可同时检测天然或重组NAG，与其他相关蛋白基本上没有交叉反应。
有效期：6个月（储存于2-8℃，避光）
