elisa原理实验条件和技术要点

应用ELISA时，您必须首先了解以下内容：

1，是检测抗体还是抗原？

2，测试结果是定性还是定量？

3，我需要检测特异性抗体的类型吗？

4，使用的抗体/单克隆抗体的亲和力是什么？

（1）抗原检测

*通常用于抗原检测的方法是非竞争性双抗体夹心法，然后是竞争法。但是，竞争方法在特定的实验中，尤其是在微生物抗原的检测中，有些困难，因为需要对抗原进行标记，这对于某些抗原来说是困难的，甚至是不可能的。另外，在竞争法中，将酶标记的抗原直接与样本混合。许多标本含有酶YZ剂或类蛋白A物质，可能会影响ELISA结果。

（2）检测抗体

检测抗体类型的常用方法是检测抗体类型的捕获方法。此方法通常用于检测特异性IgG，IgA和IgM。该方法的DY步是捕获需要检测的抗体类型，下一步是检测捕获的抗体是否为具有特定抗原的抗体。间接ELISA检测IgG相对简单，但不适用于检测其他类型的抗体，因为血清中特异性IgG的存在将与IgM或IgA竞争抗原结合。

竞争法中有两种检测抗体的方法：一种是将标记的抗体和样品同时加入反应孔中，但标记的抗体和样品中的抗体必须是不同的决定因素。结合抗原另一种是先添加标本，清洗并添加标记的抗体。

竞争法比间接法更容易判断结果，而且更加灵敏和具体。

无论选择哪种方法，ELISA都包含6个步骤：

1，抗原或抗体被吸附在固相上； 2.添加标本和试剂； 3.孵育和洗涤； 4.添加酶标抗原或抗体； 5.添加适当的底物； 6.检测与分析结果。