ELISA等免疫学方法检测饲料中的动物源性成分

ELISA等免疫学方法检测饲料中的动物源性成分

免疫学方法用于物种的鉴定已有很长的历史，早在20世纪初建立在特异性抗体—抗原反应之上的免疫学方法就已经被应用于肉的种类鉴别，现在已有多种试剂盒被研发出来用于饲料中动物源性成分的检测。其主要原理是应用抗原与抗体的特异性结合，即用一个物种的特异性抗原制作特异性抗体，然后用此抗体检测样品中有无特异性的抗原进而用于检测样品中有无此物种的成分存在。然而，肉骨粉一般都要经过高温高压处理，在这个过程中许多蛋白质都发生了变性，失去了抗原性和水溶性，这就给检测带来了困难。

为了使用免疫学方法鉴定动物成分的种类，必须选择合适的动物种类标记作为抗原，其中肌肉组织的蛋白质具有较高的价值，应用针对肌肉组织特异性蛋白的单克隆抗体建立的免疫检测方法能够检测肌肉组织，而不会与血液和包括牛奶、蛋清、蛋黄等在内的食品蛋白发生交叉反应。目前已发现几种热稳定的蛋白质可以作为检测的目的蛋白，其中包括肌钙蛋白TnI。Hsieh等成功地研制了针对TnI的几种不同单克隆抗体，运用这些单抗建立了鉴定哺乳动物、反刍动物和单个动物(如猪、鸡)的ELISA方法，可以对经过热处理的动物组织成分进行检测，针对TnI的单抗可以检测出经过132~C 2h处理的肌肉而不降低效果。建立在TnI特异性单抗基础上的夹心ELISA已经应用于禁止动物蛋白如反刍动物、哺乳动物和所有动物种类的检测上。

ELISA方法由于它具有简单、特异和灵敏度高的优点，被广泛应用于食品和饲料中的肉类品种鉴别，并且ELISA不需要大型的科学设备，容易操作，可以进行大规模检测。然而检测的成功应首先建立在有可靠的捕获抗原的检测抗体之上。多抗和单抗都曾经应用在各种ELISA检测中，*近一些针对热处理稳定的动物蛋白的单抗被研制出来，一旦获得GX价的单抗就可以进行长期稳定的大量制备。

夹心ELISA适合于样品的检测，应用广泛，已经有多种商品试剂盒被开发出来，如ELISATechnologies公司的MELlSA—TEKMeatSpeciesKit可以对肉骨粉、饲料、烹饪过的和生肉中的反刍动物成分和猪肉成分进行检测，灵敏度*低可以达到0．05％。

可以进行快速诊断的免疫试剂条试剂盒(1ateralflow strip test kit)也被开发出来，如Neogen公司的Revealruminantfeed／MBM，可以对饲料或肉骨粉中的反刍动物成分进行检测，可以在十几分钟内得到结果。

免疫测定快速，操作简单，不需要对工作人员进行特殊的培训。例如上面提到的试纸条只要求将肉骨粉煮10rain在一种缓冲液中，然后将试纸条在这种溶液中放置lOmin，即可以读取结果。下一步研究的ZD是进一步开发更有效的抗体和从饲料中提取蛋白的方法。总之，若敏感性和特异性都能达到要求，免疫学方法从它的实用性上可以被看作为筛选方法，然而需要其他更精确的方法来确定被检样品结果的有效性。