紫外可见分光光度法应用

　　*酸碱指示剂离解常数的测定

　　分光光度法可以测定酸碱离解常数，若为一元弱酸，在溶液中的离解反应为：

　　HB ⇌ H+ + B-

　　

 

　　

 

　　若测出 [B-] 和 [HB]，就可算出Ka。测定时，配制出三份不同 pH的 HB溶液，一份为强碱性溶液，另一份为强酸性溶液，分别在B- 和 HB 的吸收峰波长处测定吸光度，由此计算出 B- 和 HB 的摩尔吸光系数。第三份为已知 pH 值的缓冲液，其 pH 值在 pKa 附近，在测得 B- 和 HB 的总吸光度后用双组分测定的方法算出 B- 和 HB 的浓度，即可计算出弱酸的离解常数。

　　由 pH= pKa

 

　　可知，当 [B-] 和 [HB]相等时： pKa = pH

　　若以 pH为横坐标，以某波长处测得的不同 pH 时的A 为纵坐标作图，得一条 S 形曲线，该曲线的中点所对应的 pH 即为 pK 值。