FPLC技术基本实验方案

FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与GX液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。

FPLC技术基本实验方案

实验原理

FPLC(fast protein liquid Chromatography)为一种特殊的GX液相层析(HPLC，high pressureliquid chromatography)装置，快速分离纯化和定量测定蛋白质组分是它的主要用途。他的本原理相同于HPLC，就是在高压条件下(20—200 kg/cm2)，通过在液相载体中分离物质的迁移速率的差异来进行分离纯化。

采用HPLC来对生物大分子分离纯化时，因为液相载体通常是有机溶剂，容易变性失活生物大分子，使得生物大分子的回收率降低。同时，采用非惰性的不锈钢来对HPLC系统的流通线路进行制造，金属离子工作状态下可能会发生解离，从而对某些蛋白质组分吸附。

FPLC的层析柱为耐高压的有机玻璃管，用耐高压的非金属材料制成其它管道，同时采用惰性液相载体，能够使蛋白组分安全快速地分离。所以FPLC对HPLC的操作简易、重复性强、分离速度快等特点加以保留，并且在生物大分子分离纯化过程中分辨率和实用性更加的高。FPLC有其专用预装柱，分子筛、离子交换、疏水层析等各类层析柱也配备了，广泛应用于生物学、化学和环境科学等领域。

实验用品

(一)器材

FPLC装置(Water公司)进样器。

(二)试剂

(1)洗脱缓冲液。

(2)20%乙醇。

(三)材料

若干待测蛋白质样品。

实验程序

1.对仪器连接情况进行检查，将电源开关打开

2.在控制台上对流速、纸速加以设计

3.经加样阀加样：在Injection位置放置阀杆，样品使用注射器加入。再扳阀杆至Load位置，样品进入层析柱。

4.对进样时间进行记录，之后依次用不同缓冲液洗脱。对各管组分进行收集。

5.结束实验之后，以20%乙醇对管道进行冲洗，将电源关闭，做好记录 。