单细胞培养步骤

建立细胞株、选择高产细胞株、分化培养或者扩大培养以及鉴定和提取分别为单细胞培养的四个步骤。

步骤1：建立细胞株

材料的确定

（1）材料选择比较容易分散的花粉。

（2）材料选择具有松脆性，容易分散的愈伤组织。

（3）材料可以从叶肉、根尖、髓组织直接获取，然而必须通过酶进行处理，然后才能够分散。

步骤2：制备悬浮细胞液

（1）在液体培养基中置入分散性好的或者经酶处理过的组织，以每分钟80-90次的速度在转床或者摇床上振荡培养。在培养一段时间以后，就会有大的细胞团和组织块、几个或者十几个细胞的聚集体以及游离的单细胞在液体培养基中出现。

（2）使用200-300目孔径的不锈钢网进行过滤，将大的细胞团和组织块去除，然后通过每分钟4000r的速度进行离心沉降，将比单细胞体积还要小的残渣碎片去除，使纯净的细胞悬浮液获得。

步骤3：选择高产细胞株

（1）在厚度为1mm的薄层固体培养基上以一定的密度接种获得的纯净细胞群，进行平板培养，使其形成细胞团，使每个细胞团尽可能地来自于一个细胞，此中细胞团叫做“细胞株”。

（2）初步鉴定和测定。按照培养目的的不同，鉴定和测定“细胞株”。从中对高抗、高品质、高产即合成能力强的“细胞株”进行选择。

步骤4：扩大培养和分化培养

按照对单细胞株鉴定和测定的结果或者培养的目的，进行扩大培养和分化培养

（1）扩大培养

用来继续增殖生化合成能力比较强的“细胞株”，然后将一些有效的成分提取出来，在天然色素工业、酶工业以及医药工业使用。

（2）分化培养

用来继续培养高品质以及高抗性的细胞团，使它们在分化培养中再生成完整植株。

步骤5：鉴定和提取

（1）鉴定和提取生化产物。

（2）分析分化的再生植株的遗传情况以及鉴定分化的再生植株的产量、品质以及抗性。