减肥药GLP-1火爆出圈，针对多肽有关物质方法该如何开发？

最近火出圈的减肥药-司美格鲁肽是一种 GLP-1 受体激动剂，由 30 个氨基酸组成的多肽药物。它模拟天然 GLP-1 在体内持续控制患者血糖水平，达到控糖或减肥的效果。

多肽药物的发展由来已久，也是目前新药研发领域备受瞩目的热门方向，包含合成多肽和重组多肽产品。大多数多肽药物通过固相多肽合成法进行生产。化学合成多肽相关杂质可能来自原辅料、生产过程，或者在生产或储存过程中因降解而产生。

随着多肽药物研究技术的提高和相关法规的完善，药审中心于今年 2 月发布了《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则（试行）》[1]，提出化学合成多肽药物药学研究的一般性技术要求。尤其在指导原则中制定了肽相关杂质的报告限、鉴定限和质控限，使得多肽有关物质的分离得到了更高的关注。肽相关杂质由于与目标分子结构相关，因此在日常方法开发过程中通常有着极大的挑战。 

增强型方法提供了一套系统的方法来开发和完善分析方法，开发流程会考虑多个变量（因素）之间的相互影响。通过增强型方法可以建立稳定耐用的多肽杂质分析方法（ICH Q14，Enhanced Approach）[2]。利用 Agilent 方法开发系统，有助于进行多肽有关物质分析的多因素多变量分析方法开发。

在方法筛选时，首先利用色谱柱选择性和流动相选择性差异，组合进行方法初筛，确定初步方法。针对多肽：建议初始有机相流动相为乙腈，流动相 B 必要时从乙腈换成甲醇或乙腈甲醇混合；三氟乙酸（TFA）因为可以抑 制色谱柱固定相硅胶表面的硅醇基，改善分离，所以 0.1% TFA 水溶液作为水相流动相而常见。随着色谱柱封端技术的成熟，流动相 A 必要时也可考虑缓冲盐体系，同时对盐类型和浓度进行进一步优化。初始方法确定后，再对温度和梯度的进行组合优化，必要时再进行 pH 的精细筛选。

从上述方法开发工作流程可以看出，色谱柱选择性会极大程度影响到初步方法的确定。因此一个合适的色谱柱组合可帮助简化方法开发。我们列出了日常安捷伦工程师在实验方法开发过程中所涉及的色谱柱组合。这些精心挑选过的色谱柱，可以支持多肽客户在日常大部分有关物质方法开发中的工作。安捷伦色谱柱按照行业最严格的质量控制规范制造而成，具有可重现的可靠性能。

图 1. 多肽有关物质方法开发工作流程示意

表 1. 多肽反相色谱分析方法开发常用的色谱柱组合

图 2. 不同色谱柱在同一方法条件下对某多肽样品选择差别对比

参考文献：

【1】国家药品监督管理局药品审评中心《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则（试行）》（2023年第12号）

【2】ICH Q14 Analytical Procedure Development Guideline (Draft version), 24 March 2022