QSight LC-MS/MS应对化妆品中63种激素测定解决方案

引言

随着人们生活水平的不断提高，大家对化妆品的使用需求和要求也在逐渐提高，并且随着网络代购的快速发展，各种欧美、日本、韩国等不同国家不同功效的化妆品逐渐走进人们的视野，其安全性也为广大消费者所关注，化妆品中所添加的化学物质对人体健康具有潜在的危害，其中糖皮质激素外用可降低毛细血管的通透性，减少渗出和细胞浸润，具有抗 炎、抗过敏、免疫抑 制等多种作用，长期使用易导致皮肤变薄、发红、发痒，甚至出现血糖升高、骨质疏松、胎儿畸形、免疫功能下降等现象，短期使用雌激素、雄激素、孕激素等性激素可使皮肤保湿，回复弹性，减少皱纹，但长期使用含有性激素的化妆品会导致色素沉积，皮肤萎缩变薄，甚至具有致癌性。

2022年3月31日，中国食品药品检定研究院发布了关于公开征求《化妆品安全技术规范》修订意见的通知，将化妆品中曲安西龙等63种激素类原料定义为原料，并在《化妆品安全技术规范》(2015版)的基础上对部分数据做了调整。本文采用QSight LC-MS/MS联用系统对化妆品中的63种激素原料进行定性定量分析，其定量限完全满足标准及相应的技术规范检测需求，轻松应对日常检测分析要求。

1、实验方法

样品处理：

膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类、面膜类样品

称取样品0.2g（精确到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入少量乙腈（3:1），在涡旋混合仪上震荡30s至试样与提取溶剂混合均匀，然后加入乙腈至近刻度，超声提取20min，静置至室温，用乙腈（3:1）定容至刻度，摇匀，以4000r/min离心10min，滤过（必要时取上清液适量用50%乙腈溶液稀释，稀释液经0.22μm滤膜过滤），滤液作为待测溶液。

液态油基类

称取样品0.2g（精确至0.001g），置于离心管中，加入2mL正己烷，在涡旋混合仪上分散，然后加入70%乙腈3mL，涡旋震荡2min，4000r/min ,离心10min，吸取下层溶液至10mL比色管中，上层正己烷层用70%乙腈3mL，自“涡旋震荡2min，…”起，重复上述步骤一次，合并两次溶液，加50%乙腈定容至刻度，滤过（必要时用适量50%乙腈溶液稀释，稀释液经0.22μm滤膜过滤），滤液作为待测液。

2、LC-MS/MS仪器方法

珀金埃尔默 LX50 UHPLC参数：

色谱柱：Shim-pack XR-ODSIII 2.0mm× 150 mm , 2.2 μm

柱温：35℃

流速：0.3 mL/min

进样量：10 μL

质谱参数：

仪器采用珀金埃尔默 QSight 420™ 三重四极杆质谱仪，离子源参数及目标原料质谱参数见文末解决方案原文件。

QSight三重四极杆液质联用仪具有自清洁功能的专 利设计，减少对日常维护的需求。与其他质谱产品相比，可获得更多的仪器运行时间（35天/年）。采用双离子源的设计，避免了多路联用方法开发的复杂性，拥有更短的样品运行时间，从而提高了生产效率。同时，利用真空压力差产生层流传输离子，具有更好的灵敏度和系统稳定性，另外样品制备简单，可以获得更高的重现性。

3、结果与讨论

本方法采用一针进样，通过Time Managed MRM正负切换模式同时测定63种激素类原料，其中59种原料采用正离子模式采集，4种原料采用负离子模式采集。图1中展示了63种原料部分MRM谱图。各个原料的峰型对称，并获得优异的色谱分离效果，保证每个色谱峰上有足够的采集点数，以便获得准确的结果及优异的重复性。

图1 63种激素类原料的部分MRM谱图（2ng/ml）

采用50%的乙腈溶液将63种激素类标准品混合溶液稀释成0.6ng/mL‒60 ng/mL的系列校准标准溶液，并绘制标准曲线，采用外标法进行定量分析。图2为随机挑选的不同流出时间时的原料的标准曲线情况。其中各个原料在线性范围内，线性关系均较好，相关系数R2均大于0.99。考察了10ng/ml浓度下的加标回收率和6针的重现性测试（见表1），实验结果表明，该方法具有良好的回收率和重现性，完全满足化妆品中激素类原料的日常检测分析。

图2 不同流出时间原料色谱图的采集点数情况示例

表1 63种原料的部分回收率、重现性及检出限数据

图3 4个原料的线性情况示例

4、结论

本文采用LX50 UHPLC-QSight 420三重四极杆液质联用系统建立了快速，高灵敏度和可靠的LC-MS/MS实验方法测定化妆品中63种激素原料，一针进样，正负切换同时检测，为化妆品中的激素测定提供了可靠的高通量检测手段，且检出限远远低于《化妆品安全技术规范》中的检出限要求，同时数据显示，其重复性和线性均较好，为后期高通量样品的测定提供可靠的保障。