光透明标记整体解决方案

光透明技术是一种让生物组织具有光学透明性的新型技术。而正常的生物组织中成分复杂，如蛋白质、脂质和血红素等物质对光的传播造成阻碍。光透明技术就是使用一种试剂或几种试剂组成的混合液通过浸泡、电泳或灌注等处理方式,使大块组织或完整器官达到视觉下透明或光学仪器下可见的效果。

光透明原理图

光透明效果图  

技术特点：

1、不会破坏了器官的完整性。

2、相对于切片，不会破坏了特殊类型细胞显微结构的连续性。

3、配合多种光学成像仪器，如光切片荧光成像系统，可加强原本仪器成像的分辨率和观测深度/空间。

LSI VTC离体光透明方法

通过结合多种荧光标记手段及光片照明成像，LSI VTC方法可以实现小鼠全脑及胚胎的三维神经结构信息的获取。同时，LSI VTC方法对脂溶性膜染料Dil良好的兼容性，使得其能够实现正常小鼠脑、脊髓、脾等多种组织器官的三维血管网的重构，以及糖尿病小鼠肾小球病理结构的三维可视化和定量统计分析。LSI VTC所具备的快速透明能力、对包括脂溶性染料在内的多种荧光色团的兼容性及良好的形态保持等优势，有望为多种组织器官的形态学与病理学研究提供重要的工具。

光透明血管标记方法

DiI标记法

DiI是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。

DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被激发后可以发出橙红色的荧光。其中，最大激发波长为549nm，最大发射波长为565nm，用于细胞膜荧光标记时，DiI的常用浓度为1-25μM，最常用的浓度为5-10μM。DiI可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。

TRITC-Dextran标记法

TRITC-Dextran标记血管，Dextran (70,000 MW, Lysine Fixable, Invitrogen)在用生理盐水稀释成15mg/ml，尾部静脉注射0.1ml。

抗体标记法

DyLight 649和CD31抗体标记血管。DyLight 64用生理盐水稀释成0.5mg/ml ，尾静脉注射0.1ml. CD31-A647抗体（10至15 mg）在200µL盐水中稀释并注射到尾静脉。

FITC标记法

中文名称异硫氰酸荧光素，具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点，是生物学中应用最为广泛的一种绿色荧光素衍生物，其异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。FITC是广泛使用的荧光基团，但其最大的缺点是淬灭快，使用抗淬灭剂可以减轻。

DyLight标记法 

DyLight 594是一种橙红色荧光团，其最大吸收波长在593nm，相应的最大发射波长是618nm。DyLight荧光染料是通过将磺酸酯加成到香豆素、呫吨类（如FITC和罗丹明）以及花箐素类荧光染剂上而成，磺酸酯使DyLight带负电荷并呈亲水性。与传统的荧光团，如FITC、罗丹明以及Cy3和Cy5等相比，DyLight荧光染料具有较宽的激发和发射波段，其吸收峰最大值可从350nm直到777nm，分子较小而渗透性更好，且由于其水溶性可以实现高染料与蛋白质的比例，而不引起共轭物的沉淀的优势。并且与传统的荧光团相比，具有发光亮度更强，灵敏度更高，背景更低的优势，同时其对pH的稳定性更好，发光也更持久，因此更适合于拍照。DyLight荧光荧光染料作为荧光显微镜、细胞生物学和分子生物学内的生物分子、细胞和组织标记物，可应用于生物技术和研究等众多领域。

光透明神经标记方法

嗜神经病毒标记法

神经元网络是大脑行使一切功能的物质基础，是我们理解大脑功能机制的物质基础，其异常将导致各类神经精神疾病。嗜神经病毒(neurotropic virus) 是一类能感染神经细胞，且能沿神经环路传播增殖的病毒。利用嗜神经病毒作为示踪工具，可以实现神经回路跨突触示踪及神经元投射示踪。嗜神经病毒具有高特异、灵敏和灵活的标记和有效地研究神经元网络，经改造的嗜神经病毒包括腺相关病毒AAV、伪狂犬病毒PRV、狂犬病毒以及其它可感染神经元的慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒等。

转基因荧光标记法

转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学。基因片段的来源可以是提取特定生物体基因组中所需要的目的基因，也可以是人工合成指定序列的DNA 片段。通过转基因方法可对特异性或非特异性神经元进行荧光标记。转基因荧光适用于包括果蝇、斑马鱼、小鼠、大鼠、灵长类等在内的各种模式动物，可以研究在正常、疾病及发育过程的各种状态下的神经环路、神经投射、神经胞体等方面内容。