水稻苗中苯丙氨酸解氨酶（PAL）的应用方案

原理

苯丙氨酸解氨酶是植物次生代谢中的一个关键酶。它催化 L-苯丙氨酸的脱氨反应. 释放氨而形成反式肉桂酸。根据产物反式肉桂酸在波长 290 nm 处吸光度的变化，可以测定该酶的活性。

材料与仪器

UV-1800紫外可见分光光度计、冷冻高速离心机，旋涡混合器，恒温水浴锅等

材料：黄化水稻幼苗

试剂：0. 1 mol / L硼酸缓冲液（pH 8. 8）；0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸：称取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸缓冲液（pH 8. 8）；7 mmol - 統基乙醇硼酸 缓冲液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸缓冲液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。

实验步骤

酶液制备：称取黄化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 预冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸缓冲液）、过量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否则不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成浆，再加 3.5 mL 预冷的提取液使其终体积为 5 mL。于 12 000 g 4°C 下离心15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。