牛奶中四环素类药物检测的固相萃取方法（Copure® HLB）

一、样品提取 

称取混匀牛奶试样5.00 g(精确到0.01 g)，置于50 mL离心管中， 用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至 50 mL，涡 旋混合 1 min，冰水浴超声 10 min，转移至 50 mL 离心管中， 冷却至 0℃ -4℃，5000 r/min 离心 10 min( 温度低于 15℃ )， 用快速滤纸过滤待净化。

二、SPE 柱净化（Copure® HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 

上样和洗脱：准确吸取 10 mL 备用液过 HLB 固相萃取柱， 待样液全部流出后，依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 / 水溶液 （1:9, v/v）淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa 以下减压抽 干 5 min，最后用 10 mL 甲醇 / 乙酸乙酯溶液 (5:95, v/v) 洗脱，收集洗脱液。 

重新溶解：洗脱液于 40℃氮气吹干，加 1.0 mL，10 mmol/ L 三氟乙酸水溶液溶解残余物，水系滤膜过滤，供高效液相 色谱测定。

三、仪器条件 

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器 检测波长：350 nm 流动相：A：乙腈   B：10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 

表 1 流动相梯度洗脱程序

柱温：室温 流速：1.0 mL/min 进样体积：20 µL 

四、实验结果 

表 2 0.8 mg/kg 牛奶基质中四环素的添加回收结果