HPLC-UV-CAD 在注射用头孢吡肟一致性评价中的应用

【概述】

本文建立了HPLC-UV-CAD 方法，对注射用头孢吡肟的仿制药物从杂质谱和辅料等方面进行了一致性评价初探。在UV 检测基础上，采用通用型的电雾式检测器（CAD），结合混合基质柱Trinity-P1，通过调整有机相、盐浓度等，建立了辅料精氨酸的测定方法，并可同时对药物主成分和成盐离子完成测定。通过辅料、主成分、成盐离子比例，以及杂质谱综合评价仿制药一致性。

【实验/设备条件】

2.1.1 Thermo UltiMate3000 GX液相色谱仪ChromeleonTM Chromatography Data System ，变色龙色谱软件，版本7.2 SR6

2.1.2 Corona CAD VEO 电雾式检测器

2.1.3 注射用头孢吡肟： 参比制剂，Hopira， 批号：144H004；仿制厂家1#，规格：0.5g 和1g，批号分别为：012270702, 010270701；仿制厂家2#， 规格：1.0g，批号：6F03898

2.1.4 乙腈、甲醇 ( 色谱级，Fisher 公司)， 去离子水(18.2MΩ，Millipore 纯水机)，磷酸二氢钾，（色谱纯，上海安谱实验科技有限公司）；磷酸，（分析纯AR，国药集团）；乙酸铵，（LC-MS， Fisher公司）；乙酸（LC-MS，Fisher 公司）。

【样品提取】

样品溶液制备：取注射用头孢吡肟制剂适量，精密称定，加流动相A 溶解并制成浓度为1mg/mL 的样品溶剂，直接进样分析。其中辅料精氨酸测定进样体积为2 μL，杂质谱分析进样体积为50 μL。

【实验/操作方法】

对药物杂质组成和含量进行分析，是保证药物安全性的重要方面。同时杂质谱的也反映原料药物的工艺等。本文对仿制药物和参比制剂进行杂质谱的比较，参考USP40Cefepime injection 方法进行对比分析，结果在UV254nm下，仿制药厂家1# 与参比制剂的杂质谱基本一致，且面积归一化含量相近； 仿制药厂家2# 与参比制剂相比，杂质谱组成相近，但部分杂质含量差异较大，其中RT=20.807，21.960，29.727 和30.570min 的杂质峰含量极低或没有，而RT=19.910，28.267min 的杂质峰相对含量较高。这些差异特征峰需进一步通过质谱进行定性指认。

【实验结果/结论】

本文采用HPLC-CAD 方法初步对注射用头孢吡肟制剂从杂质谱、辅料含量及其主成分、成盐离子比例等方面对比了仿制药物与参比制剂的一致性。结果采用赛默飞特有的Trinity P1 混合基质柱结合CAD 检测器，可同时完成主成分、成盐离子和辅料的分析，另外实验也对比了仿制药和参比制剂的杂质谱，实验后续工作会对差异性较大杂质进行LC-MS 的定性分析。