QuEChERS和LC-MS/MS测定全血中二氮卓类药物含量

概述

    苯二氮卓类(BZ)是精神活性药物，广泛用于ZL焦虑、失眠、烦躁、癫痫、肌肉痉挛和酒精戒断。BZ短期使用被认为是安全有效的。然而，频繁使用这些药物可能导致依赖和滥用。由于这一特性，临床、法医和毒理学实验室对监测生物样品中的这些化合物很感兴趣。生物样品常用的样品制备方法包括：先将蛋白质沉淀，然后是液-液萃取(LLE)或固相萃取(SPE)。本应用介绍了一种简便、快速、有效的全血苯二氮卓类药物定量分析方法。

    用含0.4%甲酸(FA)的2ml乙腈(MeCN)提取1mL阴性全血。采用400mg硫酸镁(MgSO4)和100mg醋酸钠(NaOAc)(预装在15 ml离心管中)使相分离加强，并将苯二氮杂卓分离至有机相中。摇匀离心后，用含150mg MgSO4，50mg PSA， 50mg C18的2ml dSPE管纯化，取1 mL上清液。MgSO4可除去萃取物中残余的水，PSA和C18去除有机酸和脂肪基质共萃取物。得到一个纯净的提取物，用于LC-MS/MS分析。

    建立苯二氮卓类化合物的基质匹配的校准曲线。10个基质匹配溶液浓度在10 ~ 500 ng/mL范围内均呈线性关系，R范围为0.9963 ~ 1.0000。通过比较同基质校准曲线与标准溶液的校准曲线的斜率来评价基质效应。基质效应很小，从-22%到18%不等。这表明带有dSPE清除的QuEChERS方法可以充分去除基质干扰，这些干扰可能导致离子的显著YZ或增强。加样回收率为85.5 ~ 105%，相对标准偏差(RSD%)为10.7%。该方法也应用于8份真实全血样本，未检出苯二氮卓类药物超过10 ng/mL的定量限。

过程

 QuEChERS提取   

a)将2 mL含0.4% FA的MeCN加入15 mL含400mg MgS04和100mg NaOAc的离心管中(ECQUUS15CT)

b)在强化样品中加入内标(IS)和适量苯并加钉溶液

c)将1 mL阴性全血加入15 mL试管中

d)使用SPEX 2010 高通量组织研磨仪以1000次/分钟的速率混匀1分钟。

e) 3000g离心5分钟

 dSPE清理  

a)将1ml上清转移到2ml dSPE管(CUMPSC18CT)中。

b)使用SPEX 2010 高通量组织研磨仪以1000次/分钟的速率混匀1分钟

c) 300g离心5分钟。

d)将0.4 mL清洗后的提取物转移到一个2ml的自动取样器小瓶中，加入0.4 mL试剂水，涡旋30秒

e)样品已准备好进行LC-MS/MS分析。

 LC-MS/MS方法  

结果

Linearity and Matrix Effect

全血回收率和RSD%在3个水平上均有升高

加入200ng/mL苯二氮卓的全血色谱图

Matrix Matched Calibration curve of 7-aminoclonazepam (R2=0.9998) 

超高通量：一次可处理576个样品或16个50mL样品瓶

超GX率：垂直振荡ZL技术，1-2min完成困难样品研磨、均质

高均一性：批量处理样品，程序化处理机制，均一性、重复性更好

更人性化：可调角度彩色触摸显示屏，可编辑、调用、存储500种方法

适用性广：程序可调，更多研磨瓶、研磨介质可供选择，WM契合不同样品研磨、混匀需求

安全可靠：双重门锁，研磨过程更安全；设置保密程序，限制查看特定方法

低温研磨：专业Kryo-Tech低温组件及可调循环程序，维持研磨全过程低温，适合温度敏感型样品