RP-HPLC-MS 方法分析几种蛋白的 胰蛋白酶酶解多肽产物的条件优化

在生物体内，蛋白的翻译后修饰过程是蛋白发挥各种不同生化功能的基础，这些翻译后修饰包括糖基化、氧化、甲基化和磷酸化等。作为生物药物的蛋白在生产、运输、保存过程中会产生变体，从而影响到药物的活性和稳定性。因此蛋白的肽谱经常被用来研究蛋白的翻译后修饰过程以及蛋白变体的存在。同时也用于生物制药行业蛋白产品初级结构的确认 [1-3] ，从而更好地控制生化药品的质量和确保病人的用药安全。本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法，得到各种蛋白的肽谱，比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时的差异，同时借助质谱，评价蛋白酶解产物 - 多肽在酸性或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。仪器配置
Thermo Ultimate 3000 系统：泵：DGP-3600RS；自动进样器：
WPS-3000TRS；柱温箱：TCC-3000RS；检测器：DAD-3000RS
质谱：TSQ Vantage
色谱软件：Chromeleon 6.8
测试条件
与紫外检测器兼容的液相色谱条件
色谱柱： 1- Acclaim 120 C18, 3mm×150mm, 3µm (P/N063691,
S/N001119)；
2-Acclaim 120 C8, 2.1mm×100mm, 3µm (P/N059123,
S/N001337)；
3-Hypersil GOLD C4, 2.1mm×150mm, 1.9µm (S/
N1008512×7, LOT10603)；
流动相： 95% 超纯水 +5% 乙腈 +0.1%TFA：5% 超纯水
+95% 乙腈 +0.08%TFA, 梯度洗脱：