Picodroplet数字PCR检测Kras突变亚克隆与抗EGFRZL晚期大肠癌的临床相关性研究

Picodroplet数字PCR检测Kras突变亚克隆与抗EGFRZL晚期大肠癌的临床相关性研究

Clinical Relevance of KRAS-Mutated Subclones Detected with Picodroplet Digital PCR in Advanced Colorectal Cancer Treated with Anti-EGFR Therapy

期刊：AACR

影响因子：8.911

通讯作者单位：American Association for Cancer Research

背景

结直肠癌是世界上第三大Z常见的癌症，每年确诊病人超过100万，其中50%将发展为转移性疾病。为了改善晚期转移性结直肠癌（MCRC）的ZL，人们开发出了单克隆抗体，如西妥昔单抗。但有证据表明，KRAS突变型肿瘤患者作为单一药物或联合化疗获得很少或没有益处。所以部分药物限制使用在KRAS野生型肿瘤患者身上。

目的

KRAS突变可预测转移性结直肠癌（MCRC）抗EGFRZL无效，只有50%的非突变患者从中受益，传统方法无法检测到低频的KRAS突变是早期研究无进展的原因。为了验证这一假设，需要高灵敏度和高精度的分子分析技术。

实验设计

从两个MCRC患者队列中选择136个KRAS、NRAS和BRAF野生型肿瘤样本41个KRAS突变肿瘤。所有患者均接受抗EGFRZL，DPCR用于KRAS或BRAF突变筛查，并与QPCR进行比较。根据KRAS突变等位基因分数分析无进展生存率（PFS）和总生存率（OS）。

结果

除确认41例KRAS突变肿瘤外，DPCR还鉴定出22例经QPCR鉴定为KRAS野生型的KRAS突变。DPCR定量的KRAS突变等位基因比例与抗EGFRZL反应率呈负相关（P<0.01）。KRAS等位基因突变率低于1%的患者与野生型KRAS肿瘤患者的PFS和OS相似。

讨论

dPCR的高灵敏度和高精度使得稀有的检测和定量成为可能，区分、量化和监控单个亚克隆的能力是基于液滴的dPCR程序的优点之一。随着高度敏感技术的发展，有必要保证突变等位基因检测的临床针对性，肿瘤由不同突变的各种细胞群体组成，选择性ZL即选择特定的药物对特定细胞群体进行ZL，从而达到较好的治LX果。在Z初的ZL过后，总是会出现耐药性，限制了ZL的临床效益。dPCR，有助于追踪个别克隆，这将使真正个性化的药物定制ZL方案，以推迟疾病的复发。

结论

这项研究表明，具有KRAS突变肿瘤的MCRC患者（至少那些KRAS突变亚克隆分数低于或等于1%）可以从抗EGFRZL中获益，而KRAS突变亚克隆分数大于1%的肿瘤患者从EGFRZL中获益甚小甚至无治LX益。

图一.对基于抗EGFR的ZL，由常规程序(QPCR)或基于液滴的dPCR确定的突变状态。

图二.采用qPCR和dPCR方法检测患者Kars突变的等位基因(包括多个亚克隆)。主要克隆为全黑方格，附加亚克隆为空黑方格。

图三. 患者对西妥昔单抗的反应是根据Kras突变等位基因的分数，突变DNA的分数表示完全应答（CR）、部分应答（PR）、稳定疾病（SD）或进展性疾病（PD）的平均值

图四.肿瘤中KRAS等位基因突变率与患者生存率的相关性。根据检测到的KRAS等位基因的分数，将177例患者的A、PFS和（B）OS分为四分位数。常规QPCR法检测为野生型的136例患者的C、PFS和（D）OS与KRAS等位基因NM分数的函数关系。