药典 夏天无——GX液相色谱法

【概述】

夏天无为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens（Thunb.）Pers的干燥块茎。春季或初夏出苗后采挖，除去茎、叶及须茎，洗净，干燥。夏天无粉味苦、微辛，性温。归肝经。主要功效为Activating blood to relieve pain，舒经活络，祛风除湿。用于中风偏瘫，头痛，跌扑损伤，风湿痹痛，腰腿疼痛。

1、          方法原理

参照《中华人民共和国药典 2020版》中夏天无，Protoopioid和盐酸巴马汀为目标物，其中，Protoopioid的检测波长为289nm，盐酸巴马汀的检测波长为345nm。以Protoopioid和盐酸巴马汀标准溶液定性，处理后的样品经色谱柱分离，峰面积外标法定量。

2、          主要仪器和试剂

1. HPLC液相色谱仪：LC220，具变波长功能；

2. 万分之一天平；

3. 蒸发回流装置及实验室常用玻璃仪器；

4. Protoopioid和盐酸巴马汀标准品。

3、         实验方法

3. 1 色谱条件

流动相：乙腈:三乙胺醋酸溶液（4mL三乙胺+15mL醋酸→500mL）=25:75；

色谱柱：C18反相柱，250mm*4.6mm*5μm；

柱温：30℃；

进样量：10μL；

波长：0~10min：289nm，10~15min：345nm，15~16min：289nm。

3.2 对照品溶液制备

准确称取Protoopioid对照品10mg于50mL容量瓶中，加1%盐酸溶液5mL溶解，再加甲醇至刻度，摇匀。另准确称取盐酸巴马汀对照品10mg于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。准确量取上述两种溶液各5mL于同一25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得40ppmProtoopioid和20ppm盐酸巴马汀标准溶液。

3.3 供试品溶液制备

准确称取夏天无粉0.5g于具塞锥形瓶中，准确加入甲醇50mL，称定重量。加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4、          实验结果

4.1 仪器稳定性

                                                                          图1 标样7针重复性测试

Protoopioid7针重复性：RSD=0.86%

盐酸巴马汀7针重复性：RSD=0.47%

4.2 标准溶液对照谱图

                                                                                       图2 混标谱图

4.3 样品谱图

                                                                                    图3 样品谱图

                                                                                图4 双样双针

ProtoopioidRD1%=0.11%，RD2%=0.05%

盐酸巴马汀RD1%=0.28%，RD2%=0.37%

4.4 标准曲线

                                                                             图5 Protoopioid标准曲线

                                                                             图6 盐酸巴马汀标准曲线

4.5 计算

a) 双样双针法（若与药典算法有出入请以药典为准）：

b)  标准曲线法