发布:
北京迪科马科技有限公司时间:
2019-12-31行业:
制药/化妆品 兽用药
样品准备/提取
2.1 称量:
牛奶:称取2.0 g样品,极ng确到0.01 g,置于50 mL塑料离心管中;
奶粉:称取0.5 g,极ng确到0.01 g,置于50 mL塑料离心管中,加入6 mL磷酸盐缓冲液混匀。
2.2 提取
(1)向离心管中加入10 mL乙腈,于涡旋振荡上涡旋混和1 min,4000 rpm离心5 min,上清液过滤到圆底烧瓶中;
(2)在残渣中加入5 mL磷酸盐缓冲液,10 mL乙腈,重复步骤(1),合并上清液;
(3)50℃下旋转蒸发,直至乙腈全部蒸出;
(4)向烧瓶中加入5 mL磷酸盐缓冲液,混匀,待净化。
*磷酸盐缓冲液:pH3.0的0.05 mol/LNa2HPO4和KH2PO4,
SPE柱净化
ProElut PLS 60 mg/3 mL(Cat.#68003)
(1)活 化: 依次加入3 mL甲醇、5 mL水、5 mL磷酸盐缓冲液,流出液弃去。
(2)上 样: 将上样液加入柱中,流出液弃去。
(3)淋 洗: 依次用5 mL 磷酸盐缓冲液、5 mL水淋洗、25%甲醇水淋洗,淋洗液弃去。
(4)洗 脱: 6 mL5%氨水甲醇洗脱,收集流出液。
(5)重新溶解: 在40℃下用减压蒸馏将收集液蒸至近干,然后用流动相定容至1 mL后,过微孔滤膜供HPLC分析。
分析条件
色谱柱: Diamonsil C18(2),250 mm×4.6 mm,5μm(Cat.#99603)
流 速: 1.0 mL/min
检测器:* UV 280 nm
柱 温: 35℃
进样量: 20 μL
流动相: A.0.2%磷酸水溶液,B.甲醇 时间/min 0 25 40 42 50 A 78 67 35 78 78 B 22 33 65 22 22
适用于牛奶和奶制品中马波沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、双氟沙星、司帕沙星、帕珠沙星、环丙沙星、加替沙星、沙拉沙星、恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹的检测。
1 马波沙星、2 恩诺沙星、3 氧氟沙星、4 诺氟沙星、5 双氟沙星、6 司帕沙星、7 帕珠沙星、8 环丙沙星、9 加替沙星、10 沙拉沙星、11 恶喹酸、12 萘啶酸、13 氟甲喹