解决方案

19种氨基酸UPLC分析方法(异硫氰酸苯酯柱前衍生法)




方法:

HPLC



基质:

标准溶液



应用编号:

103087



化合物:

Asp(天冬氨酸)Glu(谷氨酸)Ser(丝氨酸)Gly(甘氨酸)His(组氨酸)Arg(精氨酸)Thr(苏氨酸)Ala(丙氨酸)Pro(脯氨酸)Tyr(酪氨酸)Val(缬氨酸)Met(蛋氨酸)Cys(胱氨酸)IIe(异亮氨酸)Leu(亮氨酸)Nle(正亮氨酸)Phe(苯丙氨酸)Trp(色氨酸)Lys(赖氨酸)





色谱柱:


Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm




样品前处理:


1 溶液配制: 氨基酸储备液:称取一定量氨基酸标准品,用0.1 mol/l HCl水溶液溶解,配成氨基酸单标浓度为0.05 mol/l 氨基酸使用液:将储备液用0.1 mol/l HCl水溶液稀释,得到浓度为0.002 mol/l的氨基酸单标和混标,待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液:量取8.3 ml浓盐酸,然后用纯水定容至1000 ml 异硫氰酸苯酯(PITC)溶液:将250 μl异硫氰酸苯酯用乙腈定容至10 ml,得到0.2 mol/L异硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液:将1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml,得到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液:量取8.3 ml浓盐酸,然后用纯水定容至1000 ml



2 标准溶液衍生化: 量取200 μl氨基酸混合使用液,置于1.5 ml塑料离心管中,准确加100 μl 1 mol/l三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l异硫氰酸苯酯乙腈溶液,混匀,室温反应1小时,然后加入正己烷400 μl,旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层,取200 μl下层溶液与800 μl水混合,0.22 μm针式过滤器过滤,待分析。




色谱条件:


色谱柱:Endeavorsil C18,100×2.1 mm,1.8 μm (Cat#:87003)



流动相: A:0.05 mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节pH至6.50±0.05) B:甲醇:乙腈:水=20:60:20(V:V:V)



流速:0.3 mL/min



柱温:35 ℃



检测器:UV 254 nm



进样体积:2.0 μL




文章出处:

天津应用实验室



关键字:

天然氨基酸、Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、IIe(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)、UPLC、奋进、Endeavorsil C18、异硫氰酸苯酯、柱前衍生、PITC




图谱:










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