动物食品中地西泮及安眠酮的检测-赛默飞气相色谱-质谱法

发布：
赛默飞色谱与质谱中国
时间：
2019-02-18
行业：
食品/饮料/烟草肉制品
标准：
《GB29697-2013 食品安全国家标准动物性食品中地西泮和安眠酮多残留的测定气相色谱-质谱法》

【概述】

地西泮(diazepam)、安眠酮(methaqualone)在临床上作为镇静催眠药，属于精神管制药,长期服用有成瘾性和依赖性。

近年来,随着畜牧养殖业的发展,有不法分子在经济利益的驱动下,擅自在畜禽饲养中添加使用以期增加产肉量。地西泮、安眠酮在饲料中的滥用,将Z终导致畜产品中药物的残留,从而严重影响消费者的身体健康[1]。

地西泮、安眠酮的测定方法多集中在临床制药和刑侦检测方面,如血液、尿液、胃内容物等。主要有紫外分光光度法检测;液液提取,用HPLC分析;固相萃取,GC-FID或GC-MS测定;用薄层层析分离定性,用薄层扫描测定含量[1～3]。

【实验/设备条件】

色谱柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）；

柱温：150℃（1 min），10℃/min到290℃（4 min）；

进样模式：不分流进样；进样量：1 µL，分流时间1 min；

进样口温度：290℃（15 min）；

载气：氦气（99.999%），恒流模式，1 mL/min；

质谱离子源温度：310℃，传输线温度：290℃；

扫描模式：选择离子监测模式，每个离子驻留时间0.09 s，

地西泮：283,256*,241,221；安眠酮：250, 235*, 217,91；

【样品提取】

提取

取适量新鲜的猪肉样品，用匀浆机绞碎，并使均质。取均质后的供试样品，作为供试材料，空白样品作为空白试料；均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为加标回收材料。

称取试料约1.0 g(极ng确到0.01 g)，于15 ml离心管中，加入10 ml乙腈，涡旋后水浴超声5 min，8000 r/min离心10 min，取上清液于50 ml离心管中，加入30 ml正己烷，涡旋混匀后静置，弃上层液。取下层液，于50℃氮气吹至1 ml，加水4 ml，混匀备用。

净化

C18柱依次用甲醇5 mL和水5 mL活化，取备用液过柱，用50%甲醇水溶液5 mL淋洗，用70%甲醇水溶液5 mL洗脱，收集洗脱液，于50℃氮气吹干，用200μl甲醇复溶，待测。

【实验/操作方法】

本方法是将样品中的地西泮和安眠酮用乙腈提取，固相萃取的方法净化后用气相色谱-质谱进行定性、定量。该方法定量准确，灵敏度高，重现性好，能够满足目前动物性食品中地西泮和安眠酮检测的需要。

【实验结果/结论】

仪器分析方法优化：以全扫描的方式对目标物标液进行测定，得到其质谱图，根据全扫描质谱图经NIST谱库检索进一步确证目标化合物，得到其保留时间，选择合适的定性和定量的特征目标监测离子。测定时，可根据标准物和待测物的定量离子图中的峰面积，外标法定量。确证时，可根据碎片离子及其丰度比作为其阳性判别的依据。在选定的色谱条件下，标准品的色谱图见图1。

图 1.由上至下分别为甲醇空白、10 ng/ml标准溶液及基质空白的提取离子图

线性关系及测定低限：将0.5、1、5、10、50、100、500和1000 ng/ml的系列标准工作液由低浓度到高浓度进样。

以测定峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线如图2，表1.。分别将样品前处理项下的加标回收样品，按照样品前处理步骤处理，所得的溶液进样即得各组分的加标回收率，具体见表2、表3.。本实验方法检出限以3倍信噪比计算得到，本方法测定猪肉中安眠酮和地西泮的的测定低限为1.0 µg/kg。

图2.安眠酮（左）和地西泮（右）的标准曲线

表1.标准曲线结果

表2.安眠酮的加标回收率（n=5）

表3.地西泮的加标回收率（n=5，本底检出38.55ng/ml）

图3.由上至下分别为低、中、高浓度的加标回收率谱图

回收率及精密度实验：用标准添加法，在均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为加标回收材料。按上述方法进行提取、净化和测定，猪肉样品中各目标物的添加浓度均为 10 ng/ml、50 ng/ml和100 ng/ml 三个水平，每个浓度点平行 5 份，各添加谱图见图3，低浓度（10 ng/ml）各组分选择离子质谱图和标样质谱图见图4，5.。由图4和图5的对比可以看出尽管在低浓度地西泮周围杂峰较多，但是其离子比例仍然与标样接近，符合定性要求。回收率具体结果见表2、3.。