胚胎显微操作－细胞核移植

核移植技术的操作过程

1．供体核的分离技术

(1)胚细胞

用0.2％链霉蛋白酶预处理胚胎，然后机械法剥离透明带，钝头玻璃吸管反复吹吸以分离成单个卵裂球有两大重要进展：1)胚胎干细胞系的建立发育阶段上类似于内细胞团细胞，是早期胚胎经体外分化YZ培养建立的多能性细胞系，可以传代增殖，通过核移植可望获得无数个遗传上完全一致的动物现仅在小鼠上获得成功，在猪牛绵羊等家畜只分离到类胚胎干细胞，是今后一个重要的研究方向2)绵羊4细胞系的建立一显微分离胚盘细胞并在体外进行缺血饥饿传代培养，诱使细胞处于静止状态以便调整染色质结构，有助于核的重组与发育，形态上类似于胚胎干细胞，但更偏平上皮化该方法系Campbell等1996)所创立，曾被评为1996年世界十大科技新闻之

(2)体细胞

1997年，Wilmut等取绵羊乳腺细胞在特定实验条件下增殖培养6天，诱使细胞处于静止状态，以便其染色质结构调整，核进行重组，经核移植后获得了后代，开创了哺乳动物体细胞核移植成功的前例

2．受体细胞的去核技术

(1)以原核期受精卵或2细胞期胚胎为受体卵 去除原核或细胞核，成功率低，已很少采用

(2)以排出卵为受体卵

将超排回收的卵母细胞或体外培养成热的卵母细胞置于含细胞松驰素B和秋水仙胺的培养液中，通过操纵显微操作仪，一端用固定吸管吸住胚胎，另一端用一尖玻璃吸管(30um)穿透透明带进入卵周隙，或用一细长玻璃针刺破并切一部分透明带，再用呈直角的去核吸管经切口抵住细胞膜，操纵去核吸管从第1极体处吸除第1极体以及处于分裂中期的染色体和周围的部分细胞质 Sutter电动式显微操作仪MP225 双电动显微操作仪MPC325-2 显微操作仪MPC-385-2 显微操作仪 sutter显微操作仪MP-85